Anwendung von biologischem Puffer HEPES 7365-45-9 im Lactat-Dehydrogenase-Detektions-Kit

Als Schlüsselindikator für die klinische Diagnose und biologische Forschung beeinflussen die Stabilität und Genauigkeit von Lactat -Dehydrogenase (LDH) -Tektionskits direkt die Zuverlässigkeit experimenteller Ergebnisse. Unter den verschiedenen Komponenten des Reagenzus-Kits ist der biologische Puffer 4-Hydroxyethylpiperazin-Ethanesulfonsäure (Hepes -Puffer) ist zu einem Kernelement bei der Aufrechterhaltung der pH -Stabilität in der Erkennungsumgebung aufgrund ihrer einzigartigen physikochemischen Eigenschaften geworden.

Chemische Eigenschaften und Vorteile von HEPES

Hepes ist ein zwitterionisches biologisches Puffermittel, dessen molekulare Struktur einen Piperazinring, Hydroxyethyl- und Sulfonsäuregruppen umfasst und ihn mit ausgezeichneter Pufferfähigkeit ausbleibt. Sein PKA-Wert beträgt 7,55, nahe am physiologischen pH-Wert und zeigt eine effiziente Pufferleistung im pH-Bereich von 6,8 bis 8,2, insbesondere für biologische Reaktionen unter neutralen bis schwach alkalischen Bedingungen. Im Vergleich zu herkömmlichen Puffergeräten wie Tris und Phosphat hat HEPES die folgenden erheblichen Vorteile:

Hepespulver

1. Niedrige Adsorption: Seine Oberflächenträger kann die unspezifische Adsorption von Biomolekülen wie Proteinen und Enzymen verringern und experimentelle Fehler vermeiden;

2. Temperaturstabilität: Bei herkömmlichen Labortemperaturen nicht leicht zu zersetzen, geeignet für Langzeitexperimente und Probenerhaltung;

3. Biokompatibilität: Es ist nicht toxisch für Zellen, wirkt sich nicht auf die Enzymaktivität oder den Zellstoffwechsel aus und erfüllt die Sicherheitsanforderungen für biologische Tests.

Bei der LDH -Erkennung muss das Reagenz -Kit die intrazelluläre Umgebung in vitro simulieren. Die obigen Eigenschaften von HEPEs können die pH -Stabilität des Reaktionssystems sicherstellen und die durch pH -Schwankungen verursachte Verzerrung der Enzymaktivität oder die Abbau von Proben vermeiden.

Der Mechanismus von HEPES im LDH -Erkennungskit

Das Kernprinzip des LDH -Nachweiss besteht darin, NAD+auf NADH durch enzymatische Reaktion zu reduzieren, die mit chromogenen Wirkstoffen (wie int) reagiert, um messbare Formaldehydprodukte zu erzeugen. Während dieses Prozesses können leichte Änderungen des pH -Werts die Enzymaktivität, die Substratbindungseffizienz und die Farbreaktionsrate direkt beeinflussen. Hepes sorgt für die Genauigkeit der Erkennung durch folgende Mechanismen:

1. PH -Stabilität: Im Reaktionssystem des Reagenzus -Kits kann der HEPES -Puffer die während des Reaktionsprozesses erzeugten Wasserstoffionen oder Hydroxidionen neutralisieren, einen konstanten pH -Wert beibehalten und sicherstellen, dass die enzymatische Reaktion unter optimalen Bedingungen erfolgt.

2. Anti -Interferenz: Das Charakteristik mit niedriger Ionenstärke kann die Interferenz von Verunreinigungen (wie Salzen und Proteinen) in der Probe auf die Reaktion verringern und die Nachweisempfindlichkeit und Spezifität verbessern;

3.. Verlängerte Haltbarkeit: Während der Lagerstufe des Reagenzus -Kits können Hepes die durch pH -Drift verursachte Inaktivierung von Enzym oder Farbreagenz verhindern und die Gültigkeitsdauer des Reagenzus verlängern.

Ein Laktat -Dehydrogenase -Zytotoxizitäts -Nachweiskit als Beispiel umfasst sein Reaktionssystem und umfasst HEPES -Puffer, Lactat -Substrat, NAD+und Farbreagenz. Während des Erkennungsprozesses kann der HEPES -Puffer (pH 7,5) die enzymatische Reaktionsumgebung stabil aufrechterhalten und eine lineare Beziehung zwischen der Erzeugungsrate von NADH und der Farbintensität von Formaldehydprodukten sicherstellen, wodurch die LDH -Aktivität durch kolorimetrische Methoden genau quantifiziert wird.

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