Warum der HEPES-Puffer 7365-45-9 bei der Detektion von Laktatdehydrogenase verwendet wird

Die Laktatdehydrogenase (LDH), als eines der wichtigsten Enzyme im intrazellulären Glykolyseweg, unterliegt unter verschiedenen pathologischen Bedingungen Veränderungen ihrer Aktivität.Eine genaue Messung der LDH-Aktivität ist nicht nur für die wissenschaftliche Grundlagenforschung von großer BedeutungDie Wahl des geeigneten Puffers ist einer der wichtigsten Faktoren, um die Genauigkeit der Testergebnisse während dieses Prozesses zu gewährleisten.

4-Hydroxyethylpiperazine-Ethansulfonsäure (HEPES-Puffer), als weit verbreiteter biologischer Puffer, wird allmählich zum Kernbestandteil von Laktat-Dehydrogenase-Detektionskits.In diesem Artikel wird aus mehreren Perspektiven eingehend analysiert, warum HEPES-Puffer bei der Detektion von Laktatdehydrogenase verwendet wird.

HEPES-Puffer

1Grundlegende Merkmale von HEPES

HEPES ist ein zwitterionischer Puffer, der Amino- und Carboxylgruppen enthält und die Molekülformel C8H18N2O4S hat.und geruchloser Feststoff mit guter Wasserlöslichkeit und chemischer Stabilität.

Der Pufferbereich von HEPES liegt zwischen pH 6,8 und 8.2, und für den Nachweis von LDH liegt sein katalytisches Umfeld in der Regel innerhalb dieses pH-Bereichs.HEPES kann die Stabilität der Reaktionsbedingungen wirksam aufrechterhalten und die Genauigkeit der Messung der Enzymaktivität gewährleistenDarüber hinaus wird die Pufferfähigkeit von HEPES nicht durch die CO2-Konzentration beeinflusst, was für Zellkulturen und biochemische Reaktionen in offenen Umgebungen besonders wichtig ist.

2Anwendung von HEPES bei der Erkennung von LDH

HEPES, einer der Kernbestandteile des Laktat-Dehydrogenase-Erkennungskits, spielt mehrere Funktionen.mit Reagenz I, das den biologischen Puffer HEPES enthält, Metallionenkomplex, LDH-Reaktionssubstrat, Tensid, LDH-Enzym-Aktivator, Konservierungsmittel und Wasser; Reagent II besteht aus HEPES, Nicotinamid-Adenin-Dinukleotid-oxidisiertem NAD+, Tensid,KonservierungsmittelDurch die getrennte Zugabe verschiedener funktionaler Bestandteile können die Reaktionsbedingungen besser kontrolliert und die Störungen durch die Trübung der Probe selbst verringert werden.

3Verbesserung der Genauigkeit und Effizienz der Erkennung

Gute Stabilität: Durch die Pufferwirkung von HEPES wird die pH-Stabilität während des gesamten Nachweisvorgangs gewährleistet, was für die Messung der Enzymaktivität von entscheidender Bedeutung ist.

Hohe Genauigkeit: Durch die Optimierung der Formel und die Anwendung strenger Qualitätskontrollmaßnahmen werden bei jedem Test einheitliche Ergebnisse erzielt.

Breiter linearer Testbereich: in der Lage, eine Vielzahl von LDH-Aktivitätsniveaus abzudecken, sich an verschiedene Probentypen anzupassen und unterschiedliche klinische Bedürfnisse zu erfüllen.

Starke Störungsbeständigkeit: Wirksam gegen den Einfluss externer Faktoren wie Temperaturänderungen oder Probenverunreinigungen, um die Echtheit der Daten zu gewährleisten.

Keine Vorverdünnung erforderlich: vereinfacht Versuchsschritte, verkürzt die Detektionszeit, besonders geeignet für geschäftige klinische Umgebungen.

4, Reaktionsprinzip und Messung

Der Prozess der katalysierten LDH-Reduktion von Pyruvinsäure auf L-Milchsäure ist eine reversible Reaktion, und wenn die Konzentration von Milchsäure hoch ist, fördert er die umgekehrte Reaktion, dhdie Synthese von Pyruvinsäure aus MilchsäureUnter geeigneten pH-Bedingungen, die im HEPES-Puffer aufrechterhalten werden, reagiert L-Milchsäure mit NAD+ zur Erzeugung von Pyruvinsäure und NADH. NADH weist eine charakteristische Absorptionsfähigkeit bei einer Wellenlänge von 340 nm auf,was bedeutet, dass die LDH-Aktivität durch Überwachung von Absorptionsänderungen quantifiziert werden kann.

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