Warum müssen Reduktionsmittel zum Tris-Puffer 150-25-4 hinzugefügt werden

Auf dem Gebiet der biologischen Wissenschaft, insbesondere im Studium der Proteinchemie und Biochemie, ist die Aufrechterhaltung der Stabilität und Aktivität von Proteinen von entscheidender Bedeutung.Als Hauptausführerin von LebensaktivitätenDie Integrität der Struktur und Funktion des Proteins hat jedoch aufgrund seiner komplexen Struktur und Empfindlichkeit entscheidende Auswirkungen auf verschiedene Lebensprozesse innerhalb der Zellen.Proteine werden leicht von verschiedenen Umweltfaktoren beeinflusst, was zu einer Verringerung ihrer Stabilität und Aktivität führt.der die Struktur und Funktion von Proteinen durch Oxidation von Aminosäureresiduen wie Cystein zerstören kann.

Tris Puffer

Um dieses Problem zu lösen, verwenden Wissenschaftler typischerweise Pufferlösungen, die Reduktionsmittel enthalten, wieTris PufferTris-Puffer wird aufgrund seiner hervorragenden Pufferfähigkeit und Stabilität weit verbreitet.Aber die Verwendung von Tris-Puffer allein reicht nicht aus, um Proteine effektiv vor oxidativen Schäden zu schützen.Daher ist die Zugabe von Reduktionsmitteln ein wichtiger Schritt geworden.

Drei häufige Reduktionsmittel im Tris-Puffer
 

1. Dithiothreitol (DTT)

DTT ist ein häufig verwendeter organischer Reduktionsmittel für kleine Moleküle, und das Hinzufügen von DTT zu Tris-Puffer kann die Proteinoxidation verhindern.es ist ein lineares Molekül, das sich nach der Oxidation in eine sechseckige zyklische Struktur mit Disulfidbindungen umwandeltIm Experiment beträgt die Konzentration von DTT in der Regel 5-10 mM, um sicherzustellen, daß die Reduktionsmittelkonzentration viel höher ist als die Proteinkonzentration im Puffer.so das Protein vor oxidativen Schäden schützt.

2. Tri (2-Carboxyethyl) Phosphin (TCEP)

TCEP ist ein Thiolreduktionsmittel mit umfangreichen Anwendungen in der Proteinchemie und Proteomikforschung.aber auch nicht in bestimmten Thiolverbindungsreaktionen entfernt werden mussAußerdem hat TCEP eine gute Stabilität, aber der Preis ist relativ hoch.

3. Mercaptoethanol (β-Mercaptoethanol, BME)

Mercaptoethanol ist ein häufig verwendeter Reduktionsmittel, das freie Thiolgruppen auf Proteinen vor Oxidation schützen kann, wodurch eine Proteinaggregation oder Denaturierung vermieden wird.die Reduktionsfähigkeit von Mercaptoethanol ist relativ gering, und eine regelmäßige Ergänzung ist erforderlich, um Versuchsergebnisse zu gewährleisten.Es kann der Poollösung zugesetzt und durch seine Verdunstung in Tröpfchen diffundiert werden, um eine nachhaltige Reduktion zu erzielen..

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Vorsichtsmaßnahmen für die Anwendung

Trispuffer wird normalerweise bei Raumtemperatur zubereitet, aber Reduktionsmittel wie DTT und Mercaptoethanol werden bei Raumtemperatur leicht abgebaut.wenn diese Reduktionsmittel dem Puffer zugesetzt werden, wird empfohlen, sie bei niedrigen Temperaturen zu lagern. Zusätzlich können Reduktionsmittel vor dem Experiment dem Tris-Puffer zugesetzt werden, um gute Ergebnisse zu erzielen.

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