Zubereitungsmethode 1,4-Piperazinediethansulfonsäure Puffer 5625-37-6

Piperazine-DiethansulfonsäurePIPES-Pufferhat eine Vielzahl von Puffersystemen, darunter die Pufferlösung Transformation Buffer (auch TB-Lösung genannt), mit der hoch effiziente kompetente Zellen vorbereitet werden können.

Competent state refers to a special physiological state in which cells (or bacteria) can take up DNA molecules from the surrounding environment and are not easily broken down by restriction endonucleases in the cellEinige Bakterien sind natürlich kompetent, wie z.B. Bacillus subtilis, und einige sind künstlich kompetent, wie z.B. Escherichia coli.Die Behandlung der Empfängerzellen mit einer speziellen Methode kann die Durchlässigkeit der Zellmembran verändern, was es zu einer kompetenten Zelle macht, die es Trägermolekülen mit fremder DNA erlaubt, durchzusteigen.

PIPES-Pulver

Zuständige TB-Lösungsrohstoff-PIPES-Pulver

Vorbereitung des Transformationspuffers:

Bei der Umwandlung kompetenter Bakterienzellen wird das Calciumchloridverfahren angewandt.37 Grad über Nacht, bis eine einzige Kolonie wächst.Wählen Sie eine Kolonie mit einem Durchmesser von 1-3 mm aus, um das SOB-Medium in einem 250 ml/3 l Erlenmeyer-Flaschen oder 80 ml/1 l Erlenmeyer-Flaschen zu impfen.Stoppen Sie die Kultur, wenn die OD600 bei 0 liegt..4-0.8, 10 Minuten lang in 4 Grad Eiswasser abkühlen, 15 Minuten lang bei 300 RPM zentrifugieren, die Bakterien nach Entfernung des Übernatants wiederherstellen, in 1/3 Volumen eiskalte TB-Lösung suspendieren,und wieder für 10 Minuten zentriformieren, um die Bakterien wiederherzustellen. mit einem Volumen von 1/12,5 TB suspendieren, DMSO mit einer Endkonzentration von 7% hinzufügen und dann 10 Minuten lang in 0,1-1 ml Aliquoten abkühlen und direkt in flüssigem Stickstoff oder bei -80°C lagern.

In der TB-Lösung aus suspendierter Escherichia coli enthalten die Hauptbestandteile Puffer-PIPES und Calciumchlorid, um Zellen in kompetente Zellen umzuwandeln.Es ist zu beachten, dass diese Methode für E. coli-Stämme, die keine Plasmide enthalten und nicht für große Plasmide geeignet sind.die optimale OD600 der verschiedenen Bakterienstämme ist ebenfalls unterschiedlich, und muss je nach Versuch angepasst werden.

Es gibt viele Methoden zur Herstellung kompetenter Zellen mit Tuberkulose, und die Wirksamkeit der verschiedenen Methoden kann unterschiedlich sein, und auch die anwendbaren Stämme oder Zelltypen können unterschiedlich sein.Das von Desheng hergestellte PIPES ist ein Pulverreagenz, und kompetente TB-Lösungen können je nach Bedarf vorbereitet werden.

Produktverpackung

Desheng Biochemical ist ein Hersteller, der sich auf die Herstellung vonbiologische PufferZu den Pufferprodukten gehören Tris ((Hydroxymethyl) Aminomethan, 4- ((2-Hydroxyethyl)-1-Piperazineethanesulfonsäure, 3-Cyclohexylaminopropanesulfonsäure usw., die alle eine Reinheit von mehr als 99% aufweisen,Wenn nötig, können Geschäftsfreunde uns kontaktieren.!