99,5% formulierte Tris gesättigtes Phenol die weiße Farbe CAS.77-86-1

Wie ist, formulierte Tris gesättigtes Phenol die weiße Farbe CAS.77-86-1

Tris sättigte Phenol ist eine hellgelbe transparente Flüssigkeit, ist der Grundanstrich die Phenolphase, und die Oberschicht ist Tris Salzsäurepuffer pH>7.8. Es ist das redistilled Phenol, das mit Tris-HCl (pH 8,0) gesättigt wird. Es hat einen scharfen Geruch und enthält Hydroxychinolin des Antioxydants 8. Tris sättigte Phenol wird verwendet, um DNA zu trennen.

Die Konfiguration von Tris sättigte Phenol: Nehmen Sie das redistilled Phenol vom Kühlschrank heraus, setzen Sie es bei Zimmertemperatur, und schmelzen Sie dann in einem Wasserbad 68°C. Setzen Sie es nicht in ein Wasserbad 68°C sofort ein, um zu verhindern, dass das Glas birst. Fügen Sie Hydroxychinolin 8 0,1% hinzu und β-mercapto Äthanol bis 0,2%, (Stammlösung 14.4MOL/ML), mischen gut, die Lösung sich dreht gelb, ausläuft sie in einen Scheidetrichter (kann in einem Becher auch durchgeführt werden), hinzufügt 1MOL/ML Tris (PH8.0) anderer Lösungsmittel, wiederholt, nachdem es gemischt hat, ließ es noch stehen, bis es sich trennt; Freigabe die untere gelbe Phenolflüssigkeit, werfen die Oberschicht, hinzufügen festes Tris über 1g/100ml, rütteln gut, entfernen die Wasserphase, addieren   0.1MOL/ML Tris (PH8.0) um mehrmals, zu pH 8,0 zu balancieren weg, 0.1MOL/ML Tris (PH8.0) gespeichert in einer braunen Flasche bei 4 Grad.

Gewebe lysate, garantieren, dass der pH herum 8,0 (addieren Sie 0,1 Volumen 1M Tris-HCl, pH 8,0, justieren es bis herum 8,0), ist, und fügen dann 0,5 Volumen von Tris sättigte das Phenol hinzu (beiseite gesetzt während des Gebrauches, entfernen Sie den niedrigeren Phenolphase Gebrauch. Die Oberschicht ist eine Lösung Tris-HCl, zu verhindern, dass des Phenols mit Luft und der Oxidation des Phenols zu verlangsamen), 0,5 Volumen Chloroform in Verbindung tritt: Isoamylalkohol (24: 1), Erschütterung für 10 Sekunden und dann Eisbad für 15 Minuten. Nach Zentrifugierung dauern Sie die Wasserphase (Oberschicht) und ein gleiches Volumen des Isopropanols hinzuzufügen, um die DNA herbeizuführen, spülen Sie es mit 75% Äthanol, aus und lösen Sie es in einer passenden Menge TE für die spätere Verwendung auf.

Tris sättigte Phenol im Allgemeinen hat einen pH, der als 7,8 größer ist und wird verwendet für DNA-Extraktion. Unter ihnen ist Phenol ein starker Proteindenaturant, der Proteine in den Zellen oder in den Geweben denaturieren und herbeiführen kann. Die Hauptfunktion von Tris ist, die Oxidation von Phenolen zu verhindern und zu stoppen. Wenn Phenole oxidiert werden, werden Quinone (zwei Benzolringe) gebildet. Enthält starke freie Radikale, die die Struktur von Nukleinsäuren schädigen können. Gleichzeitig da das pH größer als 7 ist, ist DNA in der Wasserphase und RNS ist in der organischen Phase in einer alkalischen Umwelt, damit das schwimmende getrennt wird und DNA erhalten werden kann.

Tris balancierte Phenol ist in hohem Grade ätzend, also vermeiden Sie Hautkontakt oder -einatmung. Wenn sie rot oder braun sich dreht, zeigt sie an, dass Oxidation aufgetreten ist und sie nicht verwendet werden kann.

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