CAS 1135-40-6 CAPS Cyclohexylamine Propanesulfonsäure für Pufferversuche

Kurze Einführung

Aus Sicht der molekularen Struktur ist CAPS eine Cyclohexan-N-substituierte Sulfaminsäure mit einem Molekulargewicht von 221,32 und amphoterisch.Es ist ein sehr guter biologischer Puffer mit einem pH-Pufferbereich von 9.7-11.1Es wird üblicherweise für WB-Experimente verwendet. Puffer für Protein PVDF-Transfermembran oder Nitrocellulose NC-Transfermembran.

CAPS-Puffer

WB steht für Western Blot Protein Immunoblotting Experiment. Das Prinzip besteht darin, Zellen oder biologische Proben, die durch Gelelektrophoresis mit spezifischen Antikörpern behandelt wurden,und erhalten die Expression spezifischer Proteine in den analysierten Zellen oder Geweben durch Analyse der Position und Tiefe der FärbungDie Versuchsanmerkungen sind wie folgt:

1. SDS-PAGE-Elektrophorese: ähnlich der Nukleinsäure-Hybridisierungsmethode, mit der Ausnahme, dass das ermittelte Protein, die Sonde der Antikörper und der farbige sekundäre Antikörper gekennzeichnet sind.Im Allgemeinen, Tri-Glycerin oder Tris-Tricin Puffersystem wird für Proteine mit niedrigem Molekulargewicht verwendet, und CAPS Puffersystem ist besser für Proteine mit hohem Molekulargewicht.Glycin im Puffer beeinflusst die Sequenzierung., so dass der für die Sequenzierung verwendete Transferpuffer 10mM/1CAPS10% Methanol beträgt.ein Puffer mit hoher Methanolkonzentration wirkt sich gut auf Proteine mit geringem Molekulargewicht aus, während ein Puffer mit einer niedrigen Methanolkonzentration oder gar keinem Methanol für hochmolekulare Proteine geeignet ist.

2. Wenn die PVDF-Membran verarbeitet wird, wird sie für einige Sekunden in Methanol eingetaucht und dann in den CAPS-Elektrodruckpuffer gelegt.Wenn die PVDF-Membran trocken wirdDas Elektrophorese-Gel muss ebenfalls 5-10 Minuten in CAPS-Puffer eingetaucht werden. Einige stark basierte Proteine benötigen diesen Schritt nicht.

3Die Übertragungsbedingungen sind in der Regel 50 V konstante Spannung, 100-170 mA Stromstärke und die Übertragung von Elektroabdrücken bei Raumtemperatur..Bei Proteinen mit einem höheren Molekülgewicht sollte darauf geachtet werden, dass die Übertragungszeit verlängert wird.

Produktverpackung

4. Vor der Färbung muss die PVDF-Membran herausgenommen und mit deionisiertem Wasser gespült, in Methanol eingetaucht, dann mit 0,1% Coomassie brillant blau für 30-50 Sekunden gefärbt, mit 50% Methanol entfärbt,mit deionisiertem Wasser gewaschen und getrocknet.

Das oben genannte führt einige Aspekte ein, die im Protein-Imprinting-Experiment beachtet werden müssen.Bitte tragen Sie Laborkleidung und einsatzfähige Handschuhe. Der CAPS-Elektro-Druckpuffer wird empfohlen, DeshengDie Konfiguration von hochwertiger Cyclohexylamin-Propanesulfonsäure.