Der vollständige Name von HEPES ist hydroxyethylpiperazine 4 ethanesulfonic Säure, CAS ist 7365-45-9, HEPES ist häufig benutzt in den biologischen Puffern, pH-Pufferstrecke: 6.8-8.2, die Hauptkomponente von hepes Puffer ist hydroxyethylpiperazine Ethylschwefelsäure, ist HEPES ein amphoterer Puffer, der im Wasser löslich ist und nicht stabile Komplexe mit Metallionen bildet. Es hat eine gute Dämpfungsfähigkeit in der pH-Strecke 7.2-7.4. Es wird größtenteils in den biochemischen Diagnoseausrüstungs-, DNA-/RNAextraktionsausrüstungen und IN PCR-Diagnoseausrüstungen verwendet.
Verwendet in einer Vielzahl von biochemischen Reaktionen:
1. HEPES-Puffer ist als Pufferreagens im Zellkulturmedium von verschiedenen Arten von Organismen, Zellezelladhäsion, kurzfristige Zellanhäufung und -kultur und Puffer für Reinigungsgewebe und Zellen häufig benutzt;
2. In der Proteinforschung ist ROHRE als die Komponente und das Eluent des verbindlichen Puffers in der Kationenaustauschchromatographie häufig benutzt;
3. In DNA-Forschung wird ROHRE als Puffer für Kalziumphosphat- und DNA-Niederschlagbildungssystem und als Puffer für AFM und Electroporationsexperimente benutzt.
4. Darüber hinaus hat HEPES eine bestimmte Störung zur Reaktion zwischen DNA und Restriktionsenzymen, und es ist nicht passend für Lowrys Methode, Proteingehalt zu bestimmen.
5. HEPES-Puffer ist in der Forschung von Organellen und in hohem Grade variable, pH-empfindliche Proteine und Enzyme sowie biochemische Diagnoseausrüstungen, DNA-/RNAextraktionsausrüstungen und PCR-Diagnoseausrüstungen häufig benutzt.
6. Der Reaktionspuffer, Vorhybridationspuffer und Hybridationspuffer für das Trennen und das Analysieren von Kernkraftkomponenten der RNS; verwendet für RNS und T4RNA. Molekularbiologiegrad wird benutzt, um das 3' zu beschriften - Ende von RNS mit RNS T4 Ligase, die Komponenten des Reaktionspuffers, Vorhybridationspuffer und Hybridationspuffer von Kern-RNS zu trennen und zu analysieren.
HEPES-damit verbunden Probleme
1. Der pH, der für die meisten Zellen erfordert wird, ist 7.2-7.4, aber der passende pH für Zellkultur schwankt mit den Arten von den Zellen, die gezüchtet werden. Fibroblasten bevorzugen ein miteres hohem pH-Wert (7.4-7.7), während der Durchgang von umgewandelten Zellformen Säure erfordert. pH (7.0-7.4). Da die meisten Kulturflüssigkeiten durch das System des Natriumbikarbonats (NaHCO3) und des CO2 abgedämpft werden, die CO2-Konzentration in der Gasphase im Gleichgewicht mit der Natriumbikarbonatskonzentration in der Kulturflüssigkeit sein sollte. Wenn die CO2-Konzentration in der Gasphase oder in der Brutkastenluft bei 5% eingestellt wird, fügte die Menge von NaHCO3 in der Kulturlösung ist 1.97g/L hinzu; wenn die CO2-Konzentration bei 10% aufrechterhalten wird, fügte die Menge von NaHCO3 in der Kulturlösung ist 3.95g/L. hinzu. Die Zellkultur-Flaschenkapsel sollte nicht zu fest geschraubt werden, um Gasaustausch sicherzustellen;
2. Das pH der Kulturlösung unter Verwendung HCO3- und CO2-Puffers Paare ist instabil und neigt, nach Lagerung während einer bestimmten Frist alkalisch zu sein. Wenn der pH der flüssigen Änderungen der Kultur zu schnell, HEPES-Puffer der Kulturflüssigkeit zu einer abschließenden Konzentration von 10-25mM hinzugefügt werden kann;
3. HEPES ist ein amphoterer Puffer, größtenteils benutzt in der biologischen Forschung wie oxydierender Phosphorylierung, Proteinsynthese in einer sterilen Umwelt, fotosynthetischer Phosphorylierung, CO2-Fixierung, etc.; HEPES hat keinen Effekt auf die Substrate von Metall-ionase und ist für Getriebe in der Elektronenmikroskopie (TEM) passend; in den Zellkulturmedien ist der Vorteil, dass er ein verhältnismäßig konstantes pH während der offenen Kultur- oder Zellbeobachtung instandhalten kann. HEPES (25mM) kann als Ersatz für Bikarbonatspuffer oder als Einführung des Bikarbonatspuffers (10-15mM) verwendet werden um die Beschränkung von Hochkonzentration CO2-Kulturumwelt zu entlasten. Aufgelöstes CO2 und Bikarbonat sind auch für gutes Zellwachstum sehr wichtig.
