Die Anwendung von HEPES-Puffer

HEPES (4-(2-Hydroxyethyl)-1-Piperazinethanesulfonsäure) ist ein zwitterionischer Puffer, CAS-Nr. 7365-45-9,Dieser Puffer wird im Allgemeinen in biochemischen Experimenten verwendet, um den pH-Wert des Reaktionssystems anzupassenEs hat keine toxische Wirkung auf die Zellen und hält den pH-Wert lange aufrecht.

HEPES-Pufferist ein nicht-ionischer amphoterischer Puffer mit guter Pufferfähigkeit im pH-Bereich 7,2-7.4Die Hauptmerkmale sind, dass sie einen relativ stabilen pH-Wert in Kulturmedium oder Zellbeobachtung aufrechterhalten.Die Kappen der Zellkulturkolben sollten fest zusammengezogen werden, um zu verhindern, dass das benötigte Carbonat in die Luft entweicht..

Wie man den HEPES-Puffer vorbereitet.

Hepes-Puffer kann direkt in das vorbereitete Kulturmedium mit der erforderlichen Konzentration hinzugefügt werden, gefolgt von einer Filtersterilisation.Jeder 1000 ml Kulturlösung werden 2,38 Gramm HEPES-Pulver zugesetzt.pH auf 7 einstellen.2 mit 1NNaOH nach Auflösung, Filterung und Sterilisation vor dem Auftragen beträgt die Konzentration von HEPES zu diesem Zeitpunkt 10 mmol/L.

Wenn man 99 ml Zellkulturmedium in 1 ml Grundlösung hinzufügt, beträgt die Konzentration von HEPES ebenfalls 10 mol/L. Nachstehend ist die Art und Weise, wie HEPES-Stammlösung mit 1 mol/L hergestellt wird. Zuerst löst man 23.8 g HEPES in 90 ml doppelt destilliertes WasserZweitens wird der pH-Wert mit 1 N NaOH auf 7,5 bis 8,0 angepasst; drittens werden bis zu 100 ml mit einem Wassertitrat hergestellt; anschließend wird gefiltert und sterilisiert, bevor es in eine 2 ml Flasche verpackt wird; zuletzt bei 4°C oder -20°C gelagert.

Mit hoher Temperaturbeständigkeit und einem Schmelzpunkt von bis zu 200°C wird HEPES-Pulver nicht durch Autoklaven abgebaut.wenn die wässrige HEPES-Lösung drei Stunden lang Umgebungslicht ausgesetzt wird, wird giftiges Wasserstoffperoxid (H2O2) erzeugt.Eine ist, dass die wässrige HEPES-Lösung vom Licht ferngehalten werden muss, um die Versuchsergebnisse nicht zu beeinträchtigen.Nach der Konfiguration als Lösungsmittel sollte es bei 4 °C gelagert und für bessere Ergebnisse in kurzer Zeit verwendet werden.Ein anderer wird in der Regel in einem trockenen Raum aufbewahrt und kann nicht lange direkt dem Sonnenlicht ausgesetzt werden..

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