Die Anwendung von HEPES-Puffer
HEPES (4 (2-Hydroxyethyl) - Säure 1-piperazineethanesulfonic) ist ein zwitterionic Puffer, CAS No. 7365-45-9, wird dieser Puffer im Allgemeinen in den biochemischen Experimenten benutzt, um den pH des Reaktionssystems, wie Virusbewahrungslösung oder Zellbewahrungslösung zu justieren. Er hat keine toxische Substanz auf Zellen und behält pH für eine lange Zeit bei, ist er immer im Zellkulturmedium und -kosmetik angewandt.
HEPES ist ein nichtionogener amphoterer Puffer mit guter Dämpfungsfähigkeit in der pH-Strecke 7.2-7.4. Seine Haupteigenschaft ist, ein verhältnismäßig stabiles pH im Kulturmedium oder in der Zellbeobachtung instandzuhalten. Unter diesen Standards sollten die Kappen von Zellkulturflaschen fest festgezogen werden, um das erforderliche Karbonat zu vermeiden, das in die Luft entgeht.
Die Weise, den HEPES-Puffer vorzubereiten.
Hepes-Puffer kann direkt in das vorbereitete Kulturmedium mit der erforderlichen Konzentration hinzugefügt werden, gefolgt worden von der Filtersterilisation. Fügen Sie 2,38 Gramm HEPES-Pulver jedem 1000ml der Kulturlösung hinzu, nach der Auflösung, justieren Sie den pH bis 7,2 mit 1NNaOH, filtern Sie und entkeimen Sie, bevor Sie, diesmal, die Konzentration von HEPES anwenden, ist 10mmol/L.
Der 99ml Zellkultur in Stammlösung 1ml hinzufügend mittleres Lösungsmittel, ist die Konzentration von HEPES auch 10mol/L.Below ist die Weise, HEPES-Stammlösung mit 1mol/L. vorzubereiten. Zuerst doppel-destillierte Auflösungs23.8g HEPES in 90ml Wasser; Zweitens den pH bis 7.5-8.0 mit NaOH 1N justierend; Drittens bildend zu 100ml mit Wasser Titrant; Weiter filternd und entkeimen, vor verpackt in Flasche 2ml; Schließlich gespeichert an 4℃ oder an -20℃.
Mit beständigen hohen Temperatur und Schmelzpunkt der bis zu 200°C, wird HEPES-Pulver nicht durch Autoklav vermindert. Entsprechend relevanter Literatur wenn die wässerige Lösung HEPES Umgebungslicht drei Stunden lang ausgesetzt wird, wird giftiges Wasserstoffperoxid (H2O2) erzeugt. Deshalb müssen 2 Punkte beachtet werden, man ist die HEPES, die wässerige Lösung weg von Licht gehalten werden muss damit, die Versuchsergebnisse nicht zu beeinflussen. Nachdem man als Lösungsmittel konfiguriert worden ist, sollte sie bei °C 4 gespeichert werden und verwendete in Kürze für bessere Ergebnisse. Anders wird im Allgemeinen in einen trockenen Raum gelegt und kann nicht Sonnenlicht direkt für eine lange Zeit herausgestellt werden.
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