Ähnlichkeiten und Unterschiede zwischen Tris und Tris-HCl und Tris-EDTA

Tris: Trimethylolaminomethan

Trismethylaminomethan (Tris) ist eine organische Verbindung mit der Formel (HOCH 2) 3CNH 2.Tris-Basissowohl TAE- als auch TBE-Puffer (zur Auflösung von Nukleinsäuren), die in biochemischen Experimenten verwendet werden, erfordern Tris,der sich mit Aldehyden kondensieren kann, wenn er Aminosäuren enthältBei Raumtemperatur (25°C) beträgt sein pKa 8.1Nach der Puffer-Theorie liegt der effektive Pufferbereich des Tris-Puffers zwischen pH 7.0 und 9.2.

Der pH-Wert der wässrigen Lösung der Tris-Basis beträgt etwa 10.5Im Allgemeinen wird Salzsäure hinzugefügt, um den pH-Wert auf den gewünschten Wert anzupassen, und dann kann die Pufferlösung mit diesem pH-Wert erhalten werden.Der Einfluss der Temperatur auf den pKa von Tris sollte kontrolliert werden..

Da der Tris-Puffer eine schwache alkalische Lösung ist, wird die DNA in einer solchen Lösung entprotoniert und dadurch ihre Löslichkeit verbessert.Menschen fügen EDTA oft zu Tris-Salzsäure-Puffer hinzu, um "TE-Puffer" zu machen. TE-Puffer wird zur DNA-Stabilisierung und -Speicherung verwendet. Wenn die pH-bereinigte Säure-Lösung durch Essigsäure ersetzt wird, wird "TAE-Puffer" (Tris/Acetat/EDTA) erhalten,und wenn er durch Borsäure ersetzt wirdDiese beiden Puffer werden in Nukleinsäurelektrophorese-Experimenten verwendet.

1 M Tris-HCl (pH7).4, 7.6, 8.0)

Komponentenkonzentration 1M Tris-HCl

Volumen der Zubereitung 1L

Zubereitungsmethode:

1Wiegen Sie 121,1 Gramm Tris in ein 1 L Becher.

2. etwa 800 ml deionisiertes Wasser hinzufügen und auflösen.

3. Fügen Sie die Menge konzentrierter HCl hinzu, wie in der folgenden Tabelle dargestellt, um den erforderlichen pH-Wert anzupassen.

pH Konzentriertes HCl

7.4 etwa 70 ml

7.6 etwa 60 ml

8.0 etwa 42 ml

4Die Lösung wird auf 1 L gebracht.

5Nach Sterilisation bei hoher Temperatur und hohem Druck bei Raumtemperatur aufbewahren.

Anmerkung: Vor der Anpassung des pH-Wertes muss die Lösung auf Raumtemperatur abkühlen, da der pH-Wert der Tris-Lösung mit der Temperatur stark variiert.Wenn die Temperatur um 1°C steigt, sinkt der pH-Wert der Lösung um etwa 0,03 Einheiten.

1.5 M Tris-HCl (pH8.8)

Komponentenkonzentration 1,5 M Tris-HCl

Volumen der Zubereitung 1L

Zubereitungsmethode

1181,7 Gramm Tris in einem 1 Liter Becher.

2. etwa 800 ml deionisiertes Wasser hinzufügen und auflösen.

3- Richten Sie den pH-Wert mit konzentriertem HCl auf 8,8 ein.

4Die Lösung wird auf 1 L gebracht.

5Nach Sterilisation bei hoher Temperatur und hohem Druck bei Raumtemperatur aufbewahren.

Anmerkung: Die Lösung sollte vor der Anpassung des pH-Wertes auf Raumtemperatur abgekühlt werden, da der pH-Wert der Tris-Lösung mit der Temperatur stark variiert.

Für jede Temperaturerhöhung von 1 °C sinkt der pH-Wert der Lösung um etwa 0,03 Einheiten.

Die Vorteile des Tris-HCl-Puffers sind:

Da die Tris-Basis alkalischer ist, kann mit diesem Puffersystem eine Pufferlösung mit einem weiten pH-Wertbereich von sauer bis alkalisch hergestellt werden.

2 Leichte Beeinträchtigung der biochemischen Prozesse, keine Niederschlagung mit Kalzium, Magnesiumionen und Schwermetallionen.

Die Nachteile sind:

1 Der pH-Wert der Pufferlösung wird stark von der Konzentration der Lösung beeinflusst, die Pufferlösung wird zehnmal verdünnt und die Veränderung des pH-Wertes beträgt mehr als 0.1;

2Die Temperaturwirkung ist groß und die Temperaturänderung hat einen großen Einfluß auf den pH-Wert der Pufferlösung, nämlich:031, z. B.: pH-Wert der Pufferlösung bei 4°C=8.4, dann ist der pH-Wert bei 37°C= 7.4, so dass es bei der Gebrauchstemperatur zubereitet werden muss, kann der Tris-HCl-Puffer bei Raumtemperatur bei 0 °C ~ 4 °C nicht verwendet werden.

3 Es ist leicht, CO2 in der Luft zu absorbieren, daher sollte der vorbereitete Puffer dicht verschlossen werden.

4 Diese Pufferlösung wird bestimmte pH-Elektroden stören, daher verwenden Sie eine Elektrode, die mit der Tris-Lösung kompatibel ist.

Tris-Lösung kann Kohlendioxid aus der Luft absorbieren, achten Sie auf die Dichtung während der Lagerung, wenn Sie Sterilität benötigen, können Sie Natriumazid hinzufügen.

TE ist der Tris-EDTA-Puffer (10mM Tris, 1mM EDTA, pH7,4 pH7,6 pH8,0).

Häufig verwendete Reagenzien der Molekularbiologie zur DNA-Lösung.

Bereiten Sie 10×TE Puffer (pH7) vor.4, 7.6, 8.0)

Komponentenkonzentration: 100mM Tris-HCl, 10mM EDTA

Volumen der Zubereitung: 1 L

Zubereitungsmethode:

1Die folgende Lösung wird gemessen und in ein 1L-Becher gelegt.

1M Tris-HCl Puffer (pH7).4, 7.6, 8.0) 100 ml

500 mM EDTA (pH8.0) 20 ml

2. Fügen Sie etwa 800 ml deionisiertes Wasser in den Becher und mischen Sie gleichmäßig.

3. Nach Einstellung des Volumens auf 1 L bei hoher Temperatur und hohem Druck sterilisieren.

4- Bei Raumtemperatur aufbewahren.