Ähnlichkeiten und Unterschiede zwischen Tris und Tris-HCl und Tris-EDTA

Tris: trimethylol aminomethane

Trismethylaminomethane (Tris) ist eine organische Verbindung mit der Formel (HOCH 2) 3CNH 2. Tris wird verwendet, um Puffer in den Experimenten der Biochemie und der Molekularbiologie vorzubereiten. erfordern TAE- und TBE-Puffer (benutzt, um Nukleinsäuren aufzulösen) benutzt in den biochemischen Experimenten Tris, das mit Aldehydeen kondensieren kann, wenn es Aminogruppen enthält. Eigenschaften Tris abzudämpfen ist eine schwache Basis. Bei Zimmertemperatur (25°C), sein pKa ist 8,1. Entsprechend Pufferbetriebstheorie ist die effektive Pufferbetriebsstrecke Tris-Puffers zwischen pH 7,0 und 9,2.

Der pH der wässerigen Lösung von Tris-Basis ist ungefähr 1 0,5. Im Allgemeinen wird Salzsäure addiert, um das pH auf den Sollwert zu justieren, und dann kann die Pufferlösung mit diesem pH erreicht werden. Aber gleichzeitig, sollte der Einfluss der Temperatur auf das pKa von Tris kontrolliert sein.

Da Tris-Puffer eine schwache alkalische Lösung ist, deprotonated DNA in solch einer Lösung, dadurch verbessert man seine Löslichkeit. Leute fügen häufig EDTA Salzsäurepuffer Tris hinzu, um „TE-Puffer“ zu machen. TE-Puffer wird für DNA-Stabilisierung und -speicher benutzt. Wenn die pH-justierte saure Lösung durch Essigsäure ersetzt wird, dann „TAE-Puffer“ (Tris/Azetate/EDTA) wird und wenn er durch Borsäure ersetzt wird, dann „TBE-Puffer“ (Tris/Borate/EDTA) wird erreicht erreicht. Diese zwei Puffer werden in den Nukleinsäureelektrophoreseexperimenten benutzt.

1 M Tris-HCl (pH7.4, 7,6, 8,0)

Teilkonzentration 1M Tris-HCl

Vorbereitungsvolumen 1L

Vorbereitungsmethode:

1. Wiegen Sie 121.1g Tris in einen Becher 1L.

2. Fügen Sie über 800ml des entionisierten Wassers hinzu und rühren Sie sich, um sich aufzulösen.

3. Fügen Sie die Menge starken HCl wie in der Tabelle gezeigt unten hinzu, um das erforderliche pH zu justieren.

pH starker HCl

7,4 über 70ml

7,6 über 60ml

8,0 über 42ml

4. Holen Sie die Lösung zu 1 L.

5. Nach hoher Temperatur und Hochdrucksterilisation speichern Sie bei Zimmertemperatur.

Anmerkung: Vor der Justage des pH lassen Sie die Lösung zur Raumtemperatur abkühlen, weil das pH der Tris-Lösung groß mit der Temperatur schwankt. Wenn die Temperaturanstiege durch 1°C, das pH der Lösung durch ungefähr 0,03 Einheiten sich verringert.

1,5 M Tris-HCl (pH8.8)

Teilkonzentration 1.5M Tris-HCl

Vorbereitungsvolumen 1L

Vorbereitungsmethode

1. Wiegen Sie 181.7g Tris in einem Becher 1L.

2. Fügen Sie über 800ml des entionisierten Wassers hinzu und rühren Sie sich, um sich aufzulösen.

3. Justieren Sie den pH bis 8,8 mit starkem HCl.

4. Holen Sie die Lösung zu 1 L.

5. Nach hoher Temperatur und Hochdrucksterilisation speichern Sie bei Zimmertemperatur.

Anmerkung: Vor der Justage des pH die Lösung sollte zur Raumtemperatur abgekühlt werden, weil das pH von Tris-Lösung groß mit Temperatur schwankt,

Für jeden Temperaturanstieg 1°C verringert sich der pH der Lösung durch ungefähr 0,03 Einheiten.

Die Vorteile des Puffers Tris-HCl sind:

①, weil Tris-Basis alkalischer ist, können Sie dieses Puffersystem benutzen, um eine Pufferlösung mit einer breiten Palette von pH-Werten von säurehaltigem zu alkalischem vorzubereiten;

② wenig Störung zum biochemischen Prozess, kein Niederschlag mit Kalzium, Magnesiumionen und Schwermetallionen.

Die Nachteile sind:

① das pH der Pufferlösung wird groß durch die Konzentration der Lösung beeinflußt, wird die Pufferlösung zehnmal verdünnt, und die Änderung im pH ist größer als 0,1;

② der Temperatureffekt ist groß, und der Temperaturwechsel hat einen großen Einfluss auf das pH der Pufferlösung, nämlich: △pKa/℃=-0.031, zum Beispiel: der pH der Pufferlösung an 4℃=8.4, dann das pH an 37℃= 7,4, also es muss bei der Gebrauchstemperatur vorbereitet werden, der Puffer Tris-HCl, der kann vorbereitet wird nicht bei 0 ℃ | ℃ 4 bei Zimmertemperatur, verwendet werden.

③ ist es einfach, CO2 in der Luft zu absorbieren, also sollte der vorbereitete Puffer fest versiegelt werden.

④ diese Pufferlösung behindert bestimmte pH-Elektroden, also benutzen Sie eine Elektrode, die mit Tris-Lösung kompatibel ist.

Tris-Lösung kann Kohlendioxyd von der Luft, Lohnaufmerksamkeit zum Versiegeln während der Lagerung absorbieren, wenn Sie Sterilität fordern, Sie kann Natriumazid addieren.

TE ist Tris-EDTA-Puffer (10mM Tris, 1mM EDTA, pH7.4 pH7.6 pH8.0).

Allgemein verwendete Molekularbiologiereagenzien für DNA-Auflösung.

Bereiten Sie Puffer 10×TE vor (pH7.4, 7,6, 8,0)

Teilkonzentration: 100mM Tris-HCl, 10mM EDTA

Vorbereitungsvolumen: 1L

Vorbereitungsmethode:

1. Messen Sie die folgende Lösung und legen Sie in einen Becher 1L.

1M Puffer Tris-HCl (pH7.4, 7,6, 8,0) 100 ml

500 Millimeter-EDTA (pH8.0) 20ml

2. Fügen Sie über 800ml des entionisierten Wassers dem Becher hinzu und mischen Sie gleichmäßig.

3. Nach der Justage des Volumens auf 1L, entkeimen Sie an der hohen Temperatur und am Hochdruck.

4. Speichern Sie bei Zimmertemperatur.