Einige Faktoren, die vor Chemolumineszenzreaktion betrachtet werden müssen

Die Chemolumineszenzprobe wird zu seiner großartigen Entdeckungsempfindlichkeit mehr und mehr populäres passendes. Sind luminol, isoluminol und Acridinester allgemein verwendet. In der chemischen Analyse werden Chemolumineszenzreaktionen verwendet, um die Analyten zu ermitteln direkt kovalent beschriftet mit Chemolumineszenzmitteln. Das Auslösen eines chemiluminescent Aufklebers für eine Lumineszenzreaktion erzeugt ein Signal für die Entdeckung des Analyten. Der Vorteil dieser Methode ist, dass es einfacher und klarer ist, und vermeidet den Bedarf an größerem, verhältnismäßig „klebrige“ Aufkleber. Jedoch die Faktoren für das Vorwählen der Nachweisreaktion, ob es ein Enzymaufkleber oder ein direkter Aufkleber ist, und wie man die Lichtstärke muss betrachtet werden bestimmt, bevor man die Reaktion entwirft.

Beschriftendes oder direktes beschriftendes Enzym? Die allgemeine Methode der Erzeugung von Chemolumineszenz ist, beschriftete Enzyme zu benutzen, um die Chemolumineszenzreaktion zu katalysieren. Jeder Aufkleber kann mehrfache Chemolumineszenzreaktionen, so normalerweise nur eine einleiten, oder einige Enzymaufkleber/-analyten müssen enthalten werden. Das chemiluminescent Mittel ist als Enzym-Substrat geliefertes übermäßiges, zum von Sättigungskinetik sicherzustellen. Die Lichtstärke ist eine lineare Funktion der Menge des beschrifteten Enzyms. Intensität, die Emissionsrate von Photonen pro zweites, ist das Produkt der katalytischen Umwandlung des Substrates und der Lebenszeit des Lumineszenzmittels.

Die Chemolumineszenzintensitäts-/-zeitverteilungskurve umfasst einen steigenden Anfangszeitraum und die Erweiterung der Lumineszenz bis die Hochebene oder falsche Hochebene. Wenn es keinen stabilen Hochebenenwert gibt, zeigt er an, dass das Substrat erschöpft wird, oder das Enzym inaktiviert wird. Die Entdeckung der Chemolumineszenz produziert durch Enzyme liefert große Flexibilität im Maßprozeß. Die Lichtstärke irgendwann, die durch den Höhepunkt überschreitet, zusammenhängt möglicherweise mit der Menge des Enzyms. Wenn die Geschwindigkeit eine Einzel- oder Mehrpunktsteigungsart Maßproblem ist, können Sie sie im steigenden Fach messen, um die höchste Empfindlichkeit zu erreichen, jedoch gibt es nicht viele passenden chemiluminescent Mittel. Passende Kandidaten müssen bestimmte Funktionen zuerst haben, zum der Verbindung mit anderen Molekülen zu erlauben. Wichtiger, sobald der Umbau ausgelöst wird, sollte sie das ganzes Licht in der kürzesten möglichen Zeit ausstrahlen.

Wenn Chemolumineszenz allmählich über einen Zeitraum ausgestrahlt wird, sind die Abnahmen der Signalintensität (Photonen/Sekunde) und es am besten, die optimale Anzahl von Chemolumineszenzaufklebern auf den ermittelt zu werden Spezies zu bestimmen, basiert worden auf Erfahrung. Selbst wenn theoretisch mehr Umbauten mehr Photonen zur Verfügung stellen sollten, wenn die Umbauten zu nah zusammen gesperrt werden, tritt ein löschender Effekt auf. Die Fläche und die Anzahl von den derivatizable Gruppen (normalerweise Amino oder mercapto Gruppen) liefern weitere Beschränkungen. In der Praxis können bis 10-20 Aufkleber zu einem Makromolekül gesprungen werden. Darüber hinaus mehr Aufkleber auf der Oberfläche des verbindlichen Moleküls, wahrscheinlicher behindert der Aufkleber seine Bindefähigkeiten.

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