Gründe für den hohen Hintergrund des neuen Trinder-Reagens TODB

Bei der Verwendung vondas neue Trinder-Reagenz TODB, hoher Hintergrund ist ein häufiges Problem, das sich auf die Erkennungsergebnisse auswirkt, während unzureichende Dichtung und unvollständige Tellerwäsche Schlüsselfaktoren sind, die während des Betriebs leicht übersehen werden.Diese beiden Faktoren können eine abnormale Zunahme des Farbbilds durch unspezifische Bindungen und Interferenzen von Reststoffen verursachen.Nachfolgend finden Sie eine detaillierte Analyse und Lösung.

Unzureichende Schließung: die "hinter den Kulissen" stehende treibende Kraft hinter nicht spezifischen Kombinationen

Die Funktion des Blockierungsschrittes besteht darin, die nicht bindenden Stellen auf der Oberfläche des Reaktionsträgers zu blockieren (z. B. eine enzymgebundene Immunsorptions-Analyseplatte).die Substrate, Enzymkonjugate und andere Bestandteile des TODB-Reagens werden zufällig auf die Oberfläche des Trägers adsorbiert und bilden ohne Beteiligung der Zielsubstanz ein Farbsignal.Direkter Anstieg des Hintergrundwerts.

spezifischer Grund

1- Unzureichende Versiegelungszeit: Im Allgemeinen erfordert die Versiegelung, dass sie 60 Minuten bei 37 °C oder 120 Minuten bei Raumtemperatur aufbewahrt wird.die aktiven Stellen auf der Oberfläche des Trägers können nicht vollständig durch die Blocklösung bedeckt werden (z. B. BSA), Magermilchpulver), und die nicht blockierten hydrophobischen Bereiche werden Proteinbestandteile im TODB-Reaktionssystem aktiv adsorbieren, was zu einer Hintergrundfarbe führt.

2Zu niedrige Konzentration der Blockierlösung: Wenn die Wirkstoffe in der Blockierlösung unzureichend sind, z. B. wenn die ursprüngliche 5%ige BSA auf 1% sinkt.zwischen den Molekülen kann kein dichtes Schutzfolie entstehenKomponenten wie Pfirsichperoxidase in TODB-Reagenz haften durch hydrophobe Wechselwirkungen an der Innenwand der Plattenporen,und während der Reaktion werden nichtspezifische Reaktionen mit dem Substrat auftreten.

3- Versagen der Dichtungslösung: Wenn die Dichtungslösung mehrfach eingefroren und geschmolzen wird oder länger als ihr Verfallsdatum gelagert wird,Die Proteinbestandteile im Inneren verschlechtern sich und verlieren ihre Dichtungsfunktion., was zu vielen "exponierten" Stellen auf der Oberfläche des Trägers führt, die zur Quelle von Hintergrundsignalen werden.

Unvollständige Plattenwäsche: "Stackeneffekt" von Rückständen

Die Hauptfunktion des Tellerwäsches besteht darin, freie Reagenzien zu entfernen, die nicht gebunden sind (z. B. nicht gebundene Antikörper, TODB-Vorläuferstoffe).Restsubstanzen werden in den nachfolgenden Reaktionen weiterhin an der Farbentwicklung teilnehmen., wodurch sich Hintergrundstörungen ansammeln.

Besondere Gründe

1. Zu wenige Tellerwäsche: Bei herkömmlichen Tests muss die Teller 3-5 Mal gewaschen werden.und die Reaktion wird mit dem TODB-Substrat reagieren, was zu einer zusätzlichen Farbentwicklung führt.

2. Zu viele Waschmittelrückstände: Wenn nach dem Waschen der Platte die Löcher auf dem absorbierenden Papier nicht umgekehrt und trocken geklopft werden, bleibt in jedem Loch mehr Waschmittelrückstand,und einige Komponenten im Inneren werden das Gleichgewicht des TODB-Reaktionssystems störenGleichzeitig diffundieren Restenzymkonjugate mit der Flüssigkeit in die benachbarten Löcher und verursachen eine Kreuzkontamination und erhöhen den Hintergrund.

3Es gibt ein Problem mit der Waschmaschine: Wenn die Nadel der Waschmaschine verstopft ist oder der Druck unzureichend ist, wird die Maschine nicht mehr benutzt.die Ecken der Plattenlöcher werden zu Bereichen, die nicht gewaschen werden könnenDas verbleibende TODB-Reagenz kristallisiert nach dem Trocknen und nimmt bei erneuter Auflösung an der Reaktion teil, wodurch die lokale Hintergrundfarbe dunkler wird.

Zusammenfassung: Die Wirksamkeit der Hintergrundkontrolle wird durch die operativen Details bestimmt.

Obwohl die Versiegelung und Waschung von Platten routinemäßige Schritte sind, beeinflusst ihre Qualität unmittelbar den Hintergrundgehalt der TODB-Reagenzien.Es wird empfohlen, die Methode "Verlängerung der Versiegelungszeit + Erhöhung der Anzahl der Tellerspülungen" zu verwenden., kombiniert mit Maßnahmen wie der Kontrolle der Konzentration der Dichtungslösung und der regelmäßigen Kalibrierung der Waschmaschine,die den Hintergrundwert erheblich reduzieren und die Richtigkeit der Erkennungsergebnisse gewährleisten können.

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