Optimierung von SPITZEN Bestimmungsmethode von freien Fettsäuren

Für die Bestimmung freier Fettsäuren im Serum oder Plasma wird in der Regel das Trinder-Chromogenenzym-Fotometrieverfahren verwendet.Der Nachweis von Fettsäuren wird durch viele Faktoren beeinflusst., und die Detektionsmethode muss optimiert und verbessert werden, um die Genauigkeit der Detektion zu verbessern.

Trinderchromogenerkennung FFA-Prinzip:

Die Nachweismethode besteht aus drei Reaktionsschritten: Freie Fettsäuren (FFA oder NEFA) reagieren mit überschüssigem CoA zur Erzeugung von Acyl-CoA unter Wirkung der Acetyl-CoA-Synthase (ACS).und reagiert mit Sauerstoff unter der Wirkung der Acetyl-CoA-Oxidase (ACO)Die Reaktion erzeugt 2,3-trans-enoyl CoA und Wasserstoffperoxid, und die Trinder-Reaktion wird verwendet, um Wasserstoffperoxid zu erkennen, und der FFA-Gehalt kann erhalten werden.

TOPS wird für die Bestimmung von FFA für Chromogen empfohlen

Probleme bei der Bestimmung und Optimierung von FFA:

1Übermäßiges Coenzym A in der Reaktion wird die Reaktion von Wasserstoffperoxid und Trinderchromogen stören und das gesamte Testergebnis niedrig machen.N-Ethylmaleimid (NEM) kann verwendet werden, um überschüssiges Coenzym A zu entfernen.Die Stabilität des NEM ist stark beeinträchtigt.

2Die verwendeten Acetyl-CoA-Synthetase und Acetyl-CoA-Oxidase weisen unterschiedliche Substratspezifiken für verschiedene freie Fettsäuren auf, was zu Unterschieden in den Bestimmungswerten führt.Verschiedene Enzymquellen haben unterschiedliche Substratspezifik für freie Fettsäuren mit unterschiedlicher C-KetteEs gibt 6 Arten von FFA im menschlichen Serum, und nur Enzyme mit hoher Spezifität können bei den Messresultaten keinen Unterschied machen.

3Aufgrund des Einflusses von CoA auf die Reaktion ist der lineare Bereich der Datenwerte eng. Die auf dem Markt gemessene Farbe von FFA ist MEHA, TBHB, TOOS usw., aber sie wird stark durch CoA beeinträchtigt,und es muss übertrieben sein, so dass Interferenz erforderlich ist. Weniger Chromogen. SCEP wird nicht durch Coenzym A beeinträchtigt, ist aber instabil. ADOS und TOPS werden weniger von CoA beeinträchtigt, und TOPS hat einen höheren molaren Absorptionskoeffizienten,Es ist also ein besseres Chromogen-Substrat..

4Die Sulfhydrylgruppe von DTNM kann mit der Sulfhydrylgruppe von CoA reagieren, um die Störung des Chromogens zu beseitigen.Eine kleine Menge MIT kann die Sulfhydrylgruppe von CoA entfernen und fungiert auch als KonservierungsmittelAuf der Grundlage der Verwendung von TOPS-Chromogen kann die Interferenz von CoA vollständig beseitigt und die Stabilität erheblich verbessert werden.

Wenn Sie höhere Anforderungen an die Ergebnisse der Bestimmung von FFA stellen, können Sie auf der Grundlage der oben genannten Punkte ein qualitativ besseres Kit wählen.Desheng produziert die Rohstoffe für die FFA und andere IndexbestimmungssetsWird TOPS zur direkten Bestimmung von FFA verwendet, empfiehlt es sich aufgrund der schlechten Stabilität der Lösung, vor dem Gebrauch eine Arbeitslösung zur unmittelbaren Anwendung vorzubereiten.