Optimierung von SPITZEN Bestimmungsmethode von freien Fettsäuren

Die Bestimmung von freien Fettsäuren im Serum oder im Plasma nimmt normalerweise photometrische Methode des Trinder-Chromogen-Enzyms an. Jedoch wegen der Eigenschaften dieses Tests, wird die Entdeckung von Fettsäuren durch viele Faktoren beeinflußt, und die Nachweismethode muss optimiert werden und verbessert werden, um die Genauigkeit der Entdeckung zu verbessern.

Prinzip der Trinder-Chromogen-Entdeckung FFA:

Die Nachweismethode hat drei Reaktionsschritte: freie Fettsäuren (FFA oder NEFA) reagieren mit überschüssigem CoA, um Acyl-CoA unter der Aktion von Synthase Acetyl-CoA (ACS) zu erzeugen und reagieren mit Sauerstoff unter der Aktion der Oxydase Acetyl-CoA (ACO). Die Reaktion erzeugt 2,3 trans--enoyl CoA und Wasserstoffperoxid, und die Trinder-Reaktion wird verwendet, um Wasserstoffperoxid zu ermitteln, und der Inhalt von FFA kann erhalten werden.

SPITZEN wird für FFA-Bestimmung des Chromogens empfohlen

Probleme in den FFA-Bestimmungs- und -optimierungsmethoden:

1. Übermäßiger Coenzym A in der Reaktion behindert die Reaktion des Wasserstoffperoxids und des Trinder-Chromogens und macht das ganze Testergebnistief. N-ethylmaleimide (OHNE GEGENSTIMMEN) kann verwendet werden, um überschüssigen Coenzym A. zu entfernen. Die Stabilität von OHNE GEGENSTIMMEN ist sehr betroffen. Begrenzt, nur eine Woche.

2. Die Acetyl CoA-Synthetase und -acetyl CoA-Oxydase, die benutzt wird, haben die verschiedenen Substratbesonderheiten für verschiedene freie Fettsäuren und verursachen Unterschiede in den Bestimmungsergebnissen. Verschiedene Enzymquellen haben verschiedene Substratbesonderheiten für freie Fettsäuren mit verschiedenen Kettenlängen C. Das heißt, ist- die Wartekapazität unterschiedlich. Es gibt 6 Arten FFA im menschlichen Serum, und nur Enzyme mit hoher Besonderheit zu ihnen können kein bezüglich der Maßergebnisse unterscheiden.

3. Wegen des Einflusses von CoA auf die Reaktion, ist die lineare Strecke der Datenergebnisse schmal. Die Farbe von FFA maß auf dem Markt ist MEHA, TBHB, TOOS, etc., aber sie wird groß durch CoA behindert, und sie muss übertrieben sein, also wird Störung angefordert. Weniger Chromogen. SCEP ist nicht behinderte durch Coenzym A aber ist instabil. AUFHEBEN und SPITZEN sind behinderten weniger durch CoA, und SPITZEN hat einen höheren molaren Absorptionskoeffizienten, also ist es ein besseres Chromogensubstrat.

4. Addieren Sie komplexes SULFHYDRYLDTNB und MIT, um die Menge von OHNE GEGENSTIMMEN zu verringern. Die Sulfhydrylgruppe von DTNM kann mit der Sulfhydrylgruppe von CoA reagieren, um die Störung zum Chromogen zu entfernen. Eine kleine Menge MIT kann die Sulfhydrylgruppe von CoA entfernen und tritt auch als ein Konservierungsmittel auf. Basiert auf dem Gebrauch des SPITZEN-Chromogens, kann die Störung von CoA vollständig beseitigt werden, und die Stabilität wird erheblich verbessert.

Wenn Sie höhere Anforderungen für FFA-Bestimmungsergebnisse haben, können Sie eine Ausrüstung der besseren Qualität wählen, die auf den oben genannten Punkten basiert. Desheng produziert die Rohstoffe für das FFA und andere Indexbestimmungsausrüstungen. Wenn SPITZEN benutzt wird, um FFA direkt zu bestimmen, wegen der schlechten Stabilität der Lösung, wird es empfohlen, um eine Arbeitslösung für unmittelbaren Gebrauch vor Gebrauch vorzubereiten.