In der in Verbindung stehenden biochemischen Prüfung von Enzympräparaten, zusätzlich zum Messen des Inhalts, der Konzentration und der Stabilität von den verschiedenen geprüft zu werden Indikatoren, gibt es auch Indikatoren für die Entdeckung von Enzymaktivität, wie Blutzucker, Blutlipide und Kreatinin. Für Indikatoren wie Transaminase- und Sarkosinoxydase, muss Enzymaktivität gemessen werden.
Im allgemeinen ist Enzymaktivität die Tätigkeit der Enzymkatalyse, die einen kinetischen Parameter des Enzyms-d Michaelis konstanter Kilometer miteinbezieht, das die Konzentration des Substrates (S) bedeutet, wenn die enzymatische Reaktion Hälfte der Höchstgeschwindigkeit (VM) erreicht. Die Geschwindigkeit der Enzymreaktion ist nicht einheitlich nicht linear, wie die Konzentration, aber die Anzahl von Metern in Changshu ist konstant, das eine charakteristische physikalische Größe des Enzyms ist. Die Michaelis-Konstante der Enzymänderungen mit der gemessenen Substratart, der Reaktionstemperatur, dem pH und der Ionenstärke. Unter den gleichen Bedingungen egal was die Konzentration des Enzyms ist, ist die Konzentration des erforderlichen Substrates die selbe, wenn die maximale Reaktionsgeschwindigkeit erreicht wird.
Messverfahren von Michaelis-Konstante der Sarkosinoxydase:
Bereiten Sie eine Sarkosinlösung mit einer Konzentration von 1,0, von 2,0, von 3,0, von 4,0, von 5,0, von 6,0, von 7,0, von 8,0, von 9,0, von 10.0mmo1/L mit Puffer Tris-HC1 von pH 8,0, vor und reagieren Sie an 37°C für 5 Minuten bestimmen die Anfangsoxidationstätigkeit von SOX bei verschiedenen Sarkosinkonzentrationen. Die Reaktionsgeschwindigkeit V und 1/V werden erreicht. Entsprechend der gegenseitigen Diagrammmethode Lineweaver-Burkdoppelten mit 1 [s] als der Abszisse und 1/V als der Ordinate, wurden die Kilometer und das Vmax von SOX zum Sarkosin berechnet.
Schlussfolgerung von Michaelis-Konstante der Sarkosinoxydase:
Die Michaelis-Konstante kann verwendet werden, um die Besonderheit des Enzyms zu beurteilen. Das kleiner der Kilometer-Wert, das größer die Affinität zwischen dem Enzym und dem Substrat und das Substrat als das natürliche Substrat des Enzyms dem passender ist. Entsprechend dem Test und der Berechnung der Sarkosinoxydase oben, ist die Michaelis-Gleichung y=1232.5X+8.7012 und der Korrelationskoeffizient ist 0,9947: die berechneten Kilometer- und Vmax-Werte von SOX zum Sarkosin sind 141.6mmol/L und 0.115mmol, beziehungsweise/(L.min).
Es sollte gemerkt werden, dass Sarkosinoxydase SOX von den verschiedenen Quellen einen bestimmten Unterschied in der Michaelis-Konstante des Sarkosins hat. Zum Beispiel ist der Kilometer-Wert von SOX von Corynebaclerium zum Sarkosin 21mmol/L. Da die Michaelis-Konstante nichts hat, mit der Konzentration des Enzyms und der Art des Enzyms zu tun, kann dieser Punkt für Enzymidentifizierung oder -bestimmung auch benutzt werden. Biochemisches Desheng konzentriert sich auf das Feld der biochemischen Entdeckung und liefert eine Vielzahl von Enzympräparaten einschließlich SOX, Cholesterinesterase, Glucoseoxidase, etc.
