Wird die anormale PCR-Verstärkungskurve durch die Virustransportmedien verursacht?

In der Nukleinsäureentdeckung des neuen coronavirus, ist die sehr Schlüsseltechnologie das Leuchtstoff quantitative PCR-Realzeitexperiment der Nukleinsäure, die die Kerntechnologie der neuen coronavirus Entdeckung ist. So tut welcher Effekt die Virustransportmedien, die für Virus verwendet werden, Probenahme, diegelenke auf der PCR-Verstärkung von Nukleinsäuren haben? Dieser Artikel macht eine kurze Diskussion.

Transportiert das Virus Medien, Nukleinsäure PCR-Verstärkung zu beeinflussen?

Beurteilen des Ergebnisses von der PCR-Verstärkungskurve:

Das Leuchtstoff quantitative PCR-Instrument in der neuen Kronenentdeckung ist eine Routineausrüstung für Molekularbiologieforschung geworden. Die schnelle Entwicklung dieser Nachweismethode und die Dringlichkeit der Entdeckungsaufgabe haben auch die höheren Anforderungen für das Entdeckungspersonal vorgebracht und sie erfordert, tüchtig zu sein, wenn sie die Ergebnisse der Daten beurteilten. Für das Urteil des Ergebnisses Fluoreszenz quantitativen PCR, ist das intuitivste Urteil, zu sehen, ob die Verstärkungskurve normal ist. In den normalen Experimenten stoßen Sie auf Probleme mit anormalen Verstärkungskurven, wie verbilligten Verstärkungskurven, schlechter Wiederholbarkeit zwischen mehrfachen Brunnen und erhoben Verstärkungskurven von negativen Proben.

Gründe für anormale PCR-Verstärkungskurve:

1. Bestätigen Sie, ob die Software-Einstellungen korrekt sind. Überprüfen Sie die Ausrüstungsanweisungen, zu überprüfen ob die Zeit, Temperatur, Zykluszahl, Fluoreszenzsammlung, werden etc. richtig eingestellt und ob das vorgewählte Reagens ROX als Bezugsleuchtstofffärbung enthält. Einige Ergebnisse zeigen, dass die Verstärkungskurve des Mehrkomponenten- Diagramms nicht emporgehoben wird, das offensichtlich eine negative Probe ist, aber die Verstärkungsdiagrammkurve wird emporgehoben, damit sie die Schwellenlinie kreuzt, und stattdessen einen CT-Wert hat. Dieses ist, weil die Software einen Fehler im automatischen Abzug der Grundlinie macht. Die Methode von die Grundlinie manuell justieren kann normal sein, indem man die Grundlinie neu definiert.

2. Überprüfen Sie, ob die Verbrauchsmaterialien und die Instrumentzusätze richtig benutzt werden. Verbrauchsmaterialien sind für Realzeit-PCR wichtiger. Viele anormalen Verstärkungskurven werden durch missbräuchliche Verwendung von Verbrauchsmaterialien verursacht.

3. Zu bestimmen, ob die Reagenzien, die benutzt werden, normal sind, zuerst bestimmen, ob die Reagenzien effektiv sind, einschließlich die Prüfung, ob die Reagenzien innerhalb des Gültigkeitszeitraums sind, ob sie wiederholt viele Male eingefroren und aufgetaut werden und ob die Beförderungsbedingungen normal sind. Wenn alles oben normal seien Sie, dann müssen Sie betrachten, ob es irgendeine Nachlässigkeit ausführlich Operation gibt.

Von den oben genannten Punkten kann es gesehen werden, dass die Virustransportmedien nicht direkt die Verstärkungskurve beeinflussen, es beeinflußt nur die Virusproben, aber dieses kann durch einen Kontrolltest mit positiven Proben getan werden, um zu bestimmen, ob die Virusbewahrungslösung eine Auswirkung auf die Virusproben. hat. Es gibt zwei Arten Desheng-Virus-Transportmedien, die inaktivierte Art und die aktivierte Art sind für Nukleinsäure PCR-Experimente passend.