Wie geht rekombinante Glycerolkinase mit Detektionsstörungen um?

Triglyceride (TG) sind ein wichtiger Bestandteil der Blutfette, und ihre Konzentrationswerte sind Schlüsselindikatoren zur Beurteilung des Risikos von Herz-Kreislauf-Erkrankungen. Seit vielen Jahren stützt sich die klinische Detektion von Triglyceriden hauptsächlich auf ELISA-Kits (Enzyme-linked Immunosorbent Assay). Eines der Kernenzyme in dieser Methode, Glycerolkinase (GK), ist für die Katalyse der Erzeugung von Glycerin-3-phosphat aus Glycerin verantwortlich, wodurch eine Reihe von enzymatischen Reaktionen eingeleitet und letztendlich der TG-Gehalt durch Photometrie bestimmt wird. Traditionelle natürliche Quellen für Glycerolkinase sind jedoch oft von störenden Enzymen wie NADH-Oxidase und Katalase begleitet, die Reaktionssubstrate verbrauchen oder Nebenreaktionen erzeugen können, was zu großen Abweichungen und einer schlechten Reproduzierbarkeit der Detektionsergebnisse führt. Angesichts der Schmerzpunkte in dieser Branche hat sich rekombinante Glycerolkinase herauskristallisiert, die mit ihren Eigenschaften hoher Reinheit und geringer Störung die klinische Testung in eine neue Ära der Präzision führt.

1, Problem der störenden Enzyme: der "unsichtbare Killer" der traditionellen Detektion

Bei der enzymgebundenen Immunosorbent-Assay-Methode zur Detektion von Triglyceriden muss Glycerolkinase synergistisch mit Glycerophosphat-Oxidase, Peroxidase und anderen Enzymen zusammenarbeiten, um chromogene Substanzen durch die Trinder-Reaktion zu erzeugen. Enthält die Glycerolkinase-Präparation jedoch NADH-Oxidase, baut diese unspezifisch NADH (reduziertes Coenzym I) ab, was zu einer Abnahme der Absorption führt; Ist Katalase vorhanden, zersetzt sie das in der Reaktion erzeugte Wasserstoffperoxid, wodurch die Farbintensität reduziert wird. Das Vorhandensein dieser beiden störenden Enzyme kann in milden Fällen zu Abweichungen von der Standardkurve führen und in schweren Fällen die Detektionsergebnisse vollständig ungültig machen. Natürliche Quellen von Glycerolkinasen (z. B. aus Bakterien oder Pilzen extrahiert) sind aufgrund ihrer komplexen Extraktionsprozesse und Reinigungsschwierigkeiten oft schwer vollständig zu entfernen, was sie zu einem Engpass macht, der die Detektionsgenauigkeit einschränkt.

2, Rekombinante Technologie: Reinigung aus der Quelle und Schaffung von 'reinen Enzymen'

Der Durchbruch in der rekombinanten DNA-Technologie hat revolutionäre Veränderungen in der Herstellung von Glycerolkinasen gebracht. Durch die Einführung des Glycerolkinase-Gens in gentechnisch veränderte Bakterien wie Escherichia coli und die Optimierung der Expressionsbedingungen kann rekombinante Glycerolkinase eine effiziente und kontrollierbare Expression erreichen. Noch wichtiger ist, dass das rekombinante Produktionssystem das gleichzeitige Vorhandensein mehrerer Enzyme in natürlichen Stämmen vermeidet, und nachfolgende Präzisionsreinigungsprozesse wie Chromatographie und Ultrafiltration können störende Komponenten wie NADH-Oxidase und Katalase effektiv entfernen. Die Reinheit der rekombinanten Glycerolkinase liegt bei über 95 %, was viel höher ist als bei natürlichen Enzympräparaten und den Weg der Kontamination durch störende Enzyme aus der Quelle abschneidet.

3, Stabilitätsverbesserung: Wissenschaftliche Reaktion auf Temperatur-Empfindlichkeitsprobleme

Obwohl rekombinante Glycerolkinase erhebliche Vorteile in Bezug auf die Reinheit aufweist, ist ihre Stabilität in Umgebungen über 45 °C schlecht, was einst eines der Hindernisse für ihre weit verbreitete Anwendung war. Durch proteintechnische Modifikationen wie ortsgerichtete Mutagenese und rationales Design haben Forscher die thermische Stabilität von Enzymen erfolgreich verbessert. Gleichzeitig verlängerte die Optimierung des Puffersystems und der Schutzmittelkombination in der Formulierung (unter Vermeidung der negativen Auswirkungen von Trehalose) die Lagerzeit und die Nutzungsdauer der Enzymaktivität weiter. Heutzutage kann hochwertige rekombinante Glycerolkinase die Aktivität lange Zeit bei 4 °C aufrechterhalten und unter Raumtemperatur-Detektionsbedingungen robust arbeiten, wodurch die Lager- und Betriebsanforderungen des Reagenz-Kits vollständig erfüllt werden.

Die Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. hat sich stets an die Produktions- und Betriebsphilosophie "Qualität zuerst, Technologieführerschaft" und "Innovation und Streben nach Exzellenz" gehalten und forscht und entwickelt kontinuierlich Reagenzien, die im diagnostischen Bereich benötigt werden. Seit seiner Gründung im Jahr 2005 blickt es auf eine fast 20-jährige Geschichte zurück und genießt das tiefe Vertrauen und die Unterstützung der Anwender. Die von Desheng unabhängig entwickelten und produzierten diagnostischen Enzymreagenzien wurden in verschiedene Teile der Welt verkauft. Wenn Sie in naher Zukunft einen entsprechenden Beschaffungsbedarf haben, können Sie sich gerne an uns wenden!