HEPES-Pufferist 4-Hydroxyethylpiperazine-ethanesulfonsäure (N-a-Hydroxyethylpiperazine-N-ethanesulfanäure), ein weißes Kristallpulver, Wasserstoff-Ionen-Puffer, das einen konstanten pH-Bereich über einen längeren Zeitraum kontrollieren kann.Der effektive Pufferbereich beträgt pH 6,8-8.2. Allgemein zur Herstellung von Proteinextraktionslysespuffer, Zellkulturpuffer usw. verwendet.
Die Dissoziationskonstante von HEPES beträgt 7.5Bei gleichförmigem Mischen von HEPES und dessen Na-HEPES beträgt der pH-Wert der Lösung 7.5In der Regel wird zuerst eine feste molare Konzentration von HEPES hergestellt, und dann wird der pH-Wert mit einer starken Basis (im Allgemeinen üblicherweise NaOH) auf den angegebenen Wert angepasst.NaOH dient nur zur Bereitstellung von OH. Es ist auch möglich, andere starke Basen wie KOH zu verwenden. Wenn der pH-Unterschied groß ist, verwenden Sie konzentriertes NaOH. Für die Feinabstimmung verwenden Sie verdünntes NaOH.Der Fehler ist zu groß., und wenn NaOH gelöst ist, kann die Exothermie und die Temperaturänderung die Genauigkeit der pH-Elektrode beeinflussen.
HEPES-Lysepufferpräparat:
| Lysislösung A: |
Lysislösung B: |
| HEPES |
10 mmol/L, pH7.9 |
HEPES |
20 mmol/L, pH7.9 |
| KCl |
10 mmol/l |
NaCl |
420 mmol/l |
| MgCl2 |
1.5 mmol/l |
MgCl2 |
1.5 mmol/l |
| DTT |
1 mmol/l |
DTT |
0.5 mmol/l |
| 甘油 |
5% |
Glycerin |
25% |
| EDTA |
0.2 mmol/l |
EDTA |
0.2 mmol/l |
| NP-40 |
1% |
|
|
| PMSF (vor Gebrauch hinzufügen) |
1 mmol/l |
PMSF (nach Gebrauch hinzufügen) |
0.5 mmol/l |
| Aprotinin |
3 mg/l |
Aprotinin |
5 mg/l |
| Leupeptin |
3 mg/l |
Leupeptin |
5 mg/l |
| Pfeifstein |
2 mg/l |
Pfeifstein |
3 mg/l |
Schritte:
1Die Zellen werden in ein EP-Rohr gesammelt und in die Zentrifuge gelegt (4000r/min, 5min, 4°).
2. Drei Mal mit PBS waschen, wie oben zentrifugieren, den Supernatanten entsorgen.
3. 100 μl Puffer A hinzufügen, 10 min auf Eis inkubieren, zentrifugieren (14000 R/min, 1 min) und den Supernatanten entsorgen.
4. Das Pellett in 60 Mikroliter Puffer B resuspendieren, gut mischen, 30 Minuten auf Eis zentrifugieren, zentrifugieren (14000r/min, 15min, 0 Grad), das Supernatant sammeln und das Pellett entsorgen.
Die Rolle von Lysat A wird hauptsächlich zur Freisetzung von zytoplasmatischen Proteinen und Membranproteinen, Lysat B zur Freisetzung von Kernproteinen, NP-40 ist sowohl ein Tensid als auch ein Reinigungsmittel,Es zerstört die Zellmembran (leicht), und kann sich mit dem freigesetzten Protein kombinieren, um Niederschlag zu verhindern,so dass der größte Teil des zytoplasmatischen Proteins und des Membranproteins entfernt werden kann, nachdem der Supernatant durch Zentrifugation im ersten Schritt entfernt wurdeNach der Extraktion des Kernproteins kann es 2 Stunden lang mit Lysat A dialysiert und für IP kombiniert werden.oder mit anderen Lösungen verdünnt und durch konzentrierte Zentrifuge für IP- oder andere Versuche ersetzt.
Die Hauptrohstoffe der in vitro-diagnostischen Reagenzien von Desheng sind: 1.Biologischer Puffer Tris, BICINE, HEPES, CAPS, MOPS, TAPS, EPPS, MOPSO, PIPES, PEP; 2. Chemilumineszierende Reagenzien Luminol, Isoluminol, Acridinester DMAE-NHS, Acridinester NSP-DMAE-NHS, Acridinsalz NSP-SA,Acridinsalz NSP-SA-NHS, Acridinhydrazid NSP-SA-ADH, Acridinester ME-DMAE-NHS; 3. Die Reagenzien des neuen Trinders sind TOOS, TOPS, ADOS, ADPS, ALPS, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS; 4.Anti-Bestrahlungsscheidungsgel für Zusatzstoffe für Bluttabletten, Natriumheparin, Lithiumheparin, EDTA-2K3K, EDTA-2NA, fördern das Gerinnungsmittel, das Gerinnungspulver usw. Darüber hinaus produziert es auch Virus Transport Media und Carbomer 940/980.Willkommen, Freunde, um zu kaufen..
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