Company News About HEPES-Zerstörung bufferCAS7365-45-9 wird verwendet, um das Zellkernplasma betreffendes Protein zu extrahieren
HEPES ist hydroxyethylpiperazine-ethanesulfonic Säure 4 (N'-a-hydroxythylpiperazine-N'-ethanesulfanicsäure), ein weißes Kristallpulver, Wasserstoffionpuffer, der eine konstante pH-Strecke für eine lange Zeit steuern kann. Die effektive Pufferstrecke ist pH6.8-8.2. Allgemein verwendet Proteinextraktions-Zerstörungspuffer, Zellkulturpuffer, etc. vorbereiten.
Die Dissoziationskonstante von HEPES ist 7,5. Wenn Equimolar-, ist das Mischen von HEPES und von seinem Na-HEPES, der pH der Lösung 7,5. Im Allgemeinen wird eine örtlich festgelegte molare Konzentration von HEPES zuerst vorbereitet, und dann wird der pH auf den spezifizierten Wert mit einer starken Basis justiert (im Allgemeinen allgemein verwendetes NaOH). Hier dient NaOH nur, OH- zur Verfügung zu stellen. Es ist auch möglich, andere starke Basis wie KOH zu benutzen. Wenn der pH-Unterschied groß ist, benutzen Sie starkes NaOH. Für das Einstellen benutzen Sie verdünntes NaOH. Wenn NaOH-Körper direkt addiert wird, ist der Fehler zu groß, und wenn NaOH aufgelöstes exothermisches ist und das Ändern der Temperatur beeinflußt möglicherweise die Genauigkeit der pH-Elektrode.
HEPES-Zerstörungs-Puffervorbereitung:
| Zerstörungs-Lösung A: | Zerstörungs-Lösung B: | ||
| HEPES | 10mmol/L, pH7.9 | HEPES | 20mmol/L, pH7.9 |
| KCl | 10mmol/L | NaCl | 420mmol/L |
| MgCl2 | 1.5mmol/L | MgCl2 | 1.5mmol/L |
| DTT | 1mmol/L | DTT | 0.5mmol/L |
| 甘油 | 5% | Glyzerin | 25% |
| EDTA | 0.2mmol/L | EDTA | 0.2mmol/L |
| NP-40 | 1% | ||
| PMSF (fügen Sie vor Gebrauch) hinzu | 1mmol/L | PMSF (addieren Sie Nachgebrauch) | 0.5mmol/L |
| aprotinin | 3mg/L | aprotinin | 5mg/L |
| leupeptin | 3mg/L | leupeptin | 5mg/L |
| pepstainA | 2mg/L | pepstainA | 3mg/L |
Schritte:
1. Sammeln Sie die Zellen in ein EP-Rohr und in eine Zentrifuge (4000r/min, 5min, 4 Grad).
2. Waschen Sie dreimal mit PBS, zentrifugieren Sie, wie oben, den Supernatant wegwerfen Sie.
3. Fügen Sie μl 100 von Puffer A hinzu, brüten Sie auf Eis für 10 Minute aus, zentrifugieren Sie (14000 r/min, 1 Minute), und werfen Sie den Supernatant weg.
4. Setzen Sie die Kugel in 60 Mikrolitern von Puffer B erneut aus, mischen Sie gut, Zentrifuge auf Eis für 30min, Zentrifuge (14000r/min, 15min, 0 Grad), sammeln Sie den Supernatant und werfen Sie die Kugel weg.
Unter ihnen wird die Rolle von lysate A hauptsächlich verwendet, um zellplasmatische Proteine und Membranproteine freizugeben, wird lysate B benutzt, um Kernproteine freizugeben, ist NP-40 ein Tensid und ein Reinigungsmittel, seine Rolle ist beide, die sie die Zellmembran (mild) und kann mit dem freigegebenen Protein kombinieren, um Niederschlag, so höchst des zellplasmatischen Proteins zu verhindern zerstört und Membranprotein kann entfernt werden, nachdem der Supernatant wird entfernt durch Zentrifugierung im ersten Schritt. Nachdem das Kernprotein extrahiert ist, kann es mit lysate A für 2h dialysiert werden und für IP kombiniert werden; oder verdünnt mit anderen Lösungen und durch starke Zentrifugenrohre für IP oder andere Experimente ersetzt.
Die hauptsächlichrohstoffe von Deshengs in-vitrodiagnosereagenzien sind: 1. BIS-Puffer Tris, BICINE, HEPES, CAPS, MOPS, HÄHNE, EPPS, MOPSO, ROHRE, ELAN; 2. Chemiluminescent Reagenzien luminol, isoluminol, Acridinester DMAE-NHS, Acridinester NSP-DMAE-NHS, Acridinsalz NSP-SA, Acridinsalz NSP-SA-NHS, Acridinhydrazid NSP-SA-ADH, Acridinester ME-DMAE-NHS; 3. Neuen Trinders Reagenzien TOOS, SPITZEN, AUFHEBEN, ADPS, ALPEN, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS; 4. fördern Anti-Bestrahlungstrennungsgel für Blutsammlungs-Rohrzusätze, Natriumheparin, Lithiumheparin, EDTA-2K3K, EDTA-2NA, Gerinnungsmittel, Gerinnungspulver, etc. darüber hinaus, produziert es auch Virus-Transport-Medien und carbomer 940/980. Willkommene Freunde zu kommen zu kaufen.
