Wir addieren immer Pufferlösungen, wenn wir DNA-Elektrophorese durchführen. Allgemein verwendete Pufferlösungen umfassen TAE, das Tris, Azetat und EDTA enthält, und TBE (Tris-Salz-EDTA).
Was ist die Rolle des Puffers? Eine der Funktionen des Puffers ist, den pH des Lösungsstalles beizubehalten. Wenn elektrische gegenwärtige Durchläufe durch Wasser, eine Oxidationsreaktion an der Anode auftritt, um Sauerstoff und Wasserstoffionen zu erzeugen; eine Reduzierungsreaktion tritt an der Kathode auf, um Wasserstoff- und Hydroxidionen zu erzeugen. Langfristige Elektrophorese stellt die Anodensäure und die Kathode alkalisch her. Ein gutes Puffersystem sollte eine starke Dämpfungsfähigkeit haben, den pH der Lösung an beiden Pfosten im Allgemeinen stabil zu halten. Eine andere Funktion des Elektrophoresepuffers ist, die Lösung zu machen haben eine bestimmte Leitfähigkeit, zum der Migration von DNA-Molekülen zu erleichtern. DNA ist eine alkalische Substanz, die negativ ist - aufgeladen während der Elektrophorese (Puffer pH=8) und wandert von der negativen Elektrode zur positiven Elektrode ab.
Eine andere Komponente des Elektrophoresepuffers ist EDTA, deren Zweck, Mg2+-Plasma zu chelieren und die Aktivierung der DNAse während der Elektrophorese zu verhindern ist. Da Nukleasebedarf diese Ionen, EDTA diese Ionen fest halten kann, um Nukleinsäureverminderung zu vermeiden. Aber es sollte gemerkt werden, dass Magnesiumionen auch Nebenfaktore vieler Enzyme, wie Restriktionsenzyme, DNA-Polymerasen, etc. sind, also ist die Konzentration von EDTA im Allgemeinen nicht zu hoch (normalerweise herum 1mM).
So ist welches besser, TAE oder TBE? Tatsächlich welches sollte ich für DNA-Elektrophorese verwenden? Sie hängt wirklich betreffend Ihr Experiment ab. Lassen Sie uns einen Blick auf den Unterschied zwischen die zwei werfen.
1. Die Leitfähigkeit von TBE ist größer als die von TAE. Deshalb verglichen mit TAE, ist TBE weniger wahrscheinlich, die Überhitzung im Elektrophoresebehälter zu verursachen. TBE wird für langfristige Elektrophorese empfohlen.
2. Borsäure ist ein Enzyminhibitor, also, wenn Sie Elektrophorese DNA für Verdauungsreaktion trennen müssen, wird es empfohlen, um TAE als die ElektrophoresePufferlösung zu verwenden
3. TBE ist für das Trennen von kleineren Fragmenten besser. Für die Fragmente, die kleiner als 300bp sind, ist die Migrationsgeschwindigkeit in TBE auf einem 2% Agarosegel schneller.
4. TAE ist für die Trennung von großen Fragmenten passend. Die Fragmente, die in TAE schneller, abzuwandern größer als 2kb sind (in 0,8% Agarosegel) und die Geschwindigkeit ist ungefähr 10%, die als in TBE schneller sind. TAE ist für Wiederaufnahme von DNA-Fragment passender. Verglichen mit TBE, hat TAE höhere Entschließung für supercoiled DNA.
Zusammenfassend kann die Frage von, ob TBE oder TAE ist, nicht besser generalisiert werden. Das passendste Puffersystem sollte entsprechend dem spezifischen experimentellen Zweck vorgewählt werden. Der biologische Puffer, der durch Desheng entwickelt wird, hat eine breite Pufferstrecke, und nur diese Art des Puffers wird verwendet. Das System kann Puffer mit einer breiten Palette von pH-Werten vorbereiten und kann verschiedene Spezifikationen des Verpackens zur Verfügung stellen. Kaufpuffer bei Desheng biochemisch, willkommen sich beraten und kaufen.
