Anwendung von CAPS (CAS 1135-40-6) im Protein Transmembrane-Experiment

Einleitung

Hauptbuchstaben, 3- ((Cyclohexylamin)-1-Propanesulfonsäure, eine organische Chemikalie, weißes kristallines Pulver, CAS 1135-40-6, ist ein biologischer Puffer, der häufig in biochemischen Diagnosekits verwendet wird,DNA/RNA-Extraktionskits und PCR-DiagnosekitsDer Puffer für die Enzymchemie und die HPLC-Separation von Basismedikamenten wird im Membrantransferprozess der Proteinsekvenzierung weit verbreitet.Hauptbuchstabender Puffer besteht ausHauptbuchstabenDer pH-Wert wird für die Reinigung von Fibronectin auf 11,0 angepasst.

CAPS-Puffer

Schlüsselpunkte des Betriebs

1. SDS-PAGE-Elektrophorese: unter konventionellen Bedingungen (CAPS-System: für > = 20 kD-Protein; Tris-Tricin-System: für Protein mit niedrigem Molekulargewicht, auch für Protein mit hohem Molekulargewicht);

2. Methanolkonzentration: Der Methanolkonzentrationsbereich im CAPS-Elektrodruckpuffer beträgt 0-20% (die Methanolkonzentration ist hoch und wird für den Transfer von Proteinen mit geringem Molekulargewicht verwendet;Die Methanolkonzentration ist gering oder enthält gar kein Methanol, verwendet für den Transfer von Proteinen mit hohem Molekulargewicht);

3.PVDF-Membranbehandlung: Entfernen Sie die PVDF-Membran, tauchen Sie sie mehrere Sekunden lang in Methanol ein und legen Sie sie dann in den CAPS-Elektroblotting-Puffer (Anmerkung:die PVDF-Membran muss nach dem Betrieb nicht austrocknen. Wenn die Membran trocken ist, wiederholen Sie diesen Schritt);

4. Gelbehandlung: Gelgel entfernen und 5-10 Minuten in CAPS-Puffer einweichen. (Hinweis: Dieser Schritt kann bei der Übertragung einiger starker Basisproteine PI > 9,0 übergangen werden)

5. Installieren Sie den Transfer-Slot: Tauchen Sie das Filterpapier und den Schwamm in den Elektro-Blot-Puffer ein, drücken Sie dann das elektrische Druck-Sandwich in der Reihenfolge Schwamm, Filterpapier, PVDF-Film, Gel,Filterpapier und Schwamm, und stecken Sie es in einen kleinen elektrischen Drehschlitz.

6Übertragungszustände: Übertragung unter konstanten Druck von 50 V (100-170 MA) bei Raumtemperatur für 0,5 bis 2 Stunden.Das Protein über 70 KD sollte länger übertragen werden);

7. Vorbehandlung der Färbung der PVDF-Membran: PVDF-Membran entnehmen, mit deionisiertem Wasser spülen, mehrere Sekunden in Methanol einweichen und dann färben;

8Membranfärbung: Coomassie-Brilliantblaufärbung (Löschung von 0,1% Coomassie-Brilliantblau R-250 in 40% Methanol/1% Essigsäure) für 30-50 Sekunden (nicht mehr als 1 Minute),Verfärbung mit 50% Methanol (Verfärbungslösung häufig wechseln), vollständig mit deionisiertem Wasser zu waschen und anschließend zu trocknen;

CAPS Puffervorbereitung

1. 10×CAPS(100 mmol/l) Pufferlösung wird wie folgt zubereitet: CAPS, 22,13 g; auf 900 ml deionisiertes Wasser hinzugeben; den pH-Wert auf 11,0 mit 2 mol/l NaOH (ca. 20 ml) einstellen, dann auf 1 l verdünnen und bei 4°C lagern.

2. CAPS-Elektrodruckpuffer (1 × CAPS mit 10% Methanol) wird nach folgenden Verfahren hergestellt: 200 ml 10 × CAPS; 200 ml Methanol; 1600 ml deionisiertes Wasser.

Andere Anwendungen

Hauptbuchstabenwird auch zur Herstellung von Schweißmaterialien, Klimaanlagen und Rohstoffen für die Herstellung verwendet; es wird auch zur Herstellung von Pyrotechnik verwendet; es wird als analytisches Reagenz verwendet,Wärmetauschträger, auch in der Pharmaindustrie verwendet; für Klimaanlagen, Pyrotechnik, Trockenbatterien; auch als Fluss- und Trocknungsmittel;Es wird für die Härtung von wässrigem Isocyanat in der Farbenindustrie verwendetDie Firma Desheng hat sich auf Forschung und Entwicklung und Produktion verschiedener biologischer Puffer spezialisiert, darunter CAPS, Tris, Bicine, MOPS usw. mit einer hohen Reinheit von ≥ 99%, stabilem Prozess,Unternehmen und Einzelpersonen zu weiteren Konsultationen begrüßen.