Anwendung von hydroxyethylpiperazine 4 ethanesulfonic Säure (HEPES) in der Tollwutvirusentdeckung

4-Hydroxyethylpiperazine-Ethansulfonsäure, englische AbkürzungHEPES-Puffer, CAS-Nummer: 7365-45-9, Farbe weißes kristallines Pulver, pH-Wertbereich 6,8-8.2, ist seine häufigste Anwendung als biologischer Puffer pH-Wert und seine Anwendung in Hautpflegeprodukten sind auch von großen Herstellern geliebt.Seine Anwendung bei der Erkennung von Tollwutvirus ist häufig unbekanntHeute wird der Herausgeber von Desheng das relevante Wissen für alle verbreiten.

Das Tollwutvirus produziert im Allgemeinen keine Zytopathie (CPE), wenn es sich in infizierten Zellen vermehrt, und es ist nicht einfach, Plaques unter herkömmlichen Kulturbedingungen zu bilden.Obwohl viele Wissenschaftler im In- und Ausland die Erosion des Tollwutvirus auf Hühnereimbryonzellen und BHK-21-Zellen festgestellt haben. Spotmethoden, aber diese Methoden erfordern strenge Versuchsbedingungen, oder die Operationen sind kompliziert und schwer zu beherrschen, was sich auf ihre Popularisierung und Verwendung auswirkt.Nachdem die Forscher festgestellt hatten, dass 4-Hydroxyethylpiperazine-Ethanessulfonsäure HEPES die pathogene Wirkung des Tollwutvirus auf infizierte Zellen verstärken kann, verwendeten sie diese Eigenschaft von HEPES, um eine einfache und schnelle HEPES-Plaque-Methode für das Tollwutvirus zu entwickeln.

Die Wirkung von HEPES auf die Bildung von Tollwut-Virus-Plaque

Nachdem die infizierten Zellen 3 bis 5 Tage lang bei 37°C kultiviert wurden, entwickelten die mit HEPES behandelten infizierten Zellen offensichtliche zytopathische Veränderungen an der Unterseite der Abdeckung.Nach der Färbung mit KristallviolettEs gab keine zytopathische Wirkung und keine Plaquebildung.Es kann festgestellt werden, dass HEPES offensichtlich die Bildung von Tollwutvirusplaque auf BHK-Zellen fördern kann..

Beobachtung zur Empfindlichkeit der HEPES-Plaque-Methode

Die HEPES-Plaque-Methode kann zur Bestimmung des Titers der Virusinfektion verwendet werden.Experimente zeigen, dass es einen offensichtlichen Titerabhängigkeit zwischen der Anzahl der nach einer Virusinfektion gebildeten Plaques und der Verdünnung des Virus gibt.Die Infektionstiter des gleichen Tollwutvirusstammes CTN-BHK wurden mit der HEPES-Plaque-Methode und der Mausmethode gemessen.Die Ergebnisse zeigten, dass die Anzahl der Plaques, die mit der HEPES-Plaque-Methode für 4 aufeinanderfolgende Messungen ermittelt wurde, zwischen 1 und 5 war.Der durch die Mausmethode für 4 aufeinanderfolgende Bestimmungen ermittelte Infektionstiter beträgt 6,0 ∆ 6,8 log oder 1,0 ∆ 10 ∆ 6,3 ∆ 10 / ml.Dies zeigt, dass die schnelle HEPES-Plaque-Methode die gleiche Empfindlichkeit wie die Mausmethode aufweist..

Vorteile der HEPES-Plaque-Methode

Mit Hilfe von Tollwutvirusstamm CTN-181 und CTN-BNK-Stamm zur Untersuchung der Titertitrationsmethode für die Infektiondie Ergebnisse zeigen, dass HEPES die pathogene Wirkung des Hundevirus auf die infizierten Zellen induzieren und verstärken kannWenn das Virus die Zellen infiziert, werden sie bei 37°C für 3°5 kultiviert.Nach 24 Stunden mit kristallvioletter Lösung beflecken, und berechnet die Anzahl der Plaques mit bloßem Auge nach dem Trocknen bei Raumtemperatur.Diese Plaque-Methode hat die Vorteile, dass, einfach, sparsam, sensibel und leicht zu beherrschen.

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