Anwendung von hydroxyethylpiperazine 4 ethanesulfonic Säure (HEPES) in der Tollwutvirusentdeckung

4-Hydroxyethylpiperazine ethanesulfonic Säure, englische Abkürzung HEPES, CAS-Zahl: 7365-45-9, ist Farbe weißes kristallines Pulver, ist pHstrecke 6.8-8.2, ist seine allgemeinste Anwendung als biologisches Pufferanpassung pH und seine Anwendung in den Hautpflegeprodukten werden auch von den bedeutenden Herstellern geliebt. Seine Anwendung in der Tollwutvirusentdeckung ist häufig unbekannt. Heute popularisiert der Herausgeber von Desheng relevantes Wissen für jeder.

Tollwutvirus im Allgemeinen produziert nicht zytopathisches (CPE) wenn es in den Wirtszellen reproduziert, und es ist nicht einfach, Plaketten unter herkömmlichen Kulturzuständen zu bilden. Obgleich viele Gelehrten im In- und Ausland Tollwutvirusabnutzung auf Hühnerembryozellen und Zellen BHK-21 hergestellt haben. Stellenmethoden, aber diese Methoden erfordern strenge experimentelle Bedingungen, oder die Operationen sind erschwert und schwierig zu beherrschen, das, beeinflußt ihre Popularisierung und Gebrauch. Nachdem die Forscher fanden, dass 4 hydroxyethylpiperazine ethanesulfonic saures HEPES den pathogenen Effekt des Tollwutvirus auf Wirtszellen erhöhen kann, verwendeten sie diese Eigenschaft von HEPES, um eine einfache und schnelle HEPES-Plakettenmethode für Tollwutvirus herzustellen.

Der Effekt von HEPES auf die Bildung der Tollwutvirusplakette

Nachdem die Wirtszellen an 37°C für 3 bis 5 Tage gezüchtet wurden, entwickelten die Wirtszellen, die mit HEPES behandelt wurden, offensichtliche zytopathische Änderungen an der Unterseite der Bedeckung. Nachdem man mit Kristallveilchen befleckt hatte, wurde klare Plaquenbildung gesehen, während die Wirtszellegruppe, die nicht mit HEPES behandelt wurde, keine Zeichen der Plaquenbildung zeigte. Es gibt keinen zytopathischen Effekt und keine Plaquenbildung. Es kann gesehen werden, dass HEPES die Bildung der Tollwutvirusplakette auf BHK-Zellen offensichtlich fördern kann.

Bemerkung zur Empfindlichkeit der HEPES-Plakettenmethode

Die HEPES-Plakettenmethode kann für den Titer der Virusinfektion angewendet werden. Experimente zeigen, dass es ein offensichtliches Titer-Verhältnis zwischen der Anzahl von den Plaketten gibt, die nach Virusinfektion gebildet werden und Virusverdünnung. Die ansteckenden Titer der gleichen Belastung des Tollwutvirus CTN-BHK wurden durch die HEPES-Plakettenmethode und die Mäusemethode gemessen. Die Ergebnisse zeigten, dass die Anzahl von den Plaketten, die durch die HEPES-Plakettenmethode für 4 nachfolgende Bestimmungen erreicht wurden, von 1.0×10° zu 4.0× 10*PFU/m1 reichte. Der Infektionstiter, der durch die Mäusemethode für 4 nachfolgende Bestimmungen erhalten wird, ist 6.0~6.8log oder 1.0×10°~6.3×10/ml. Dieses zeigt, dass die schnelle HEPES-Plakettenmethode die gleiche Empfindlichkeit wie die Mäusemethode hat.

Vorteile der HEPES-Plakettenmethode

Unter Verwendung der Belastung des Tollwutvirus CTN-181 und CTN-BNK Belastung, zum der Infektionstiter-Titrierungsmethode zu studieren, zeigen die Ergebnisse, dass HEPES den pathogenen Effekt des Hunde- Virus auf die Wirtszellen verursachen und erhöhen kann. Wenn das Virus die Zellen ansteckt, werden sie an 37°C für 3~5 gerade, gezüchtet 50~00mmol/L HEPES auf der Abdeckung des halbfesten Mediums der Methylzellulose am ersten Tag, Fleck mit violetter Kristalllösung nach 24 Stunden hinzuzufügen und die Anzahl von Plaketten durch bloße Augen berechnen, nachdem man bei Zimmertemperatur getrocknet hat. Verglichen mit der Insektenstellenmethode, die in der vorhergehenden Literatur berichtet wird, hat diese Plakettenmethode die Vorteile von schnellem, von einfachem, von wirtschaftlichem, von empfindlichem und von einfachem zu beherrschen.

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