Agarosegelelektrophorese und DNA

Agarosegelelektrophorese ist eine allgemein verwendete Methode für Isolierung, Identifizierung und Reinigung von DNA-Fragmenten. Wenn DNA-Moleküle im Agarosegel schwimmen, haben sie Gebühreneffekt und Molekularsiebeffekt. DNA-Moleküle sind negativ - aufgeladen in pH-Lösung über isoelektrischem Punkt und in der Bewegung zur positiven Elektrode auf dem elektrischen Gebiet. Wegen der sich wiederholenden Struktur des glycophosphate Rückgrats, hat die selbe Menge doppelsträngiger DNA fast die gleiche Nettogebühr, also können sie auf die positive Richtung mit der gleichen Geschwindigkeit umziehen.

Verschiedene Konzentrationen des Agarosegels können DNA-Fragmente von 200bp zu 50kb trennen. In der Agaroselösung wurde niedrige Konzentration von ethidum Bromid (EB) in die Agaroselösung hinzugefügt. Das DNA-Band von 10NG konnte unter UV-Licht ermittelt werden. Auf dem elektrischen Gebiet negativ - belastete DNA wanderte zur Anode in pH8.0 ab.

Agarosegel hat die folgenden Eigenschaften:

(1) ist die molekulare Größe von DNA in der Gelmatrix umgekehrt zum Wert des niedrigen Logarithmus proportional und zu dem größer das Molekül, das langsamer die Migration.

(2) ist Agarosekonzentration in einer spezifischen Größe linearen DNA-Moleküls zu Agarosegel in den verschiedenen Konzentrationen unterschiedlich. Der Logarithmus elektrophoretischer Mobilität (U) von DNA wird linear bezogen, um Konzentration (T) zu gelatieren.

(3) wenn die Spannung niedrig ist, ist die Migrationsrate von linearen DNA-Fragmenten zur angewandten Spannung proportional. Jedoch mit dem Anstieg der elektrischen Feldstärke, erhöht sich die Mobilität von DNA-Fragmenten mit verschiedenen Molekulargewicht der verschiedenen Strecken. Mit dem Anstieg der Spannung wird der effektive Trennungsbereich des Agarosegels verringert. Um die Entschließung von DNA-Fragmenten zu maximieren, die größer als 2KB sind, sollte die angewandte Spannung 5V/cm nicht übersteigen.

(4) wird elektrophoretisches Verhalten von Elektrophoresetemperatur DNA in der Agarosegelelektrophorese nicht durch die Temperatur von Elektrophorese beeinflußt. Die relative Migrationsrate von DNA-Fragmenten von verschiedenen Größen ändert erheblich nicht zwischen 4 und 30 Grad, aber Gel mit niedriger Konzentration von 0,5% oder niedriges Schmelzpunktgel ist, vorzugsweise bei 4 Grad verhältnismäßig schwach.

(5) wurde Färbung eingebettetes Ethidiumbromid der Leuchtstofffärbung benutzt, um DNA im Agarosegel zu ermitteln. Die Färbung wurde in den niedrigen Staplungspaaren und in der länglichen und eingekerbten Kreis-DNA eingebettet, machte es steifer und verringert die lineare Mobilität durch 15%.

(6) beeinflussen die Zusammensetzung des Ionenstärke-Elektrophoresepuffers und seine Ionenstärke die Mobilität von DNA-Elektrophorese. In Ermangelung der Ionen wie Missbrauch des destillierten Wassers, zum von Gelen vorzubereiten, ist die Leitfähigkeit minimale und DNA kaum Bewegungen. Im hohen Ionenstärkepuffer (wie 10 x-Elektrophoresepuffer), ist Leitfähigkeit sehr hohe und offensichtliche Wärmeproduktion.

Agarosegelelektrophorese ist auch isoliert allgemein verwendet und Identifizierung von Nukleinsäuren, wie DNA-Identifizierung, DNA-Beschränkung Endonucleasekartenproduktion, etc. wegen seiner bequemen Bedienung, einfacher Ausrüstung, kleiner Mustergröße und hoher Auflösung, diese Methode hat gewordenes der allgemeinen experimentellen Methoden in der GentechnikForschung. Agarosegel-Elektrophoreseausrüstung enthält 10 Agarosevorformlinge, schnelle Elektrophoresehochspannungslösung 15mL, DNA-Laden buffer6x 200 L, Scheren und Benutzerhandbücher, mit 8 Loch 6*6, 6 Loch 6*6, 13 Loch 6*12, 18 Loch 6*12 und andere Spezifikationen.