Vorteile von biobuffer HEPES in der Zellkultur

HEPESist eine wichtige biochemische Zubereitung in der biochemischen Industrie. Es gilt als einer der wichtigen Puffer im Bereich der biologischen Forschung.N-Hydroxyethylpiperazine-1-Ethansulfonsäure, der Charakter ist weißes kristallines Pulver, ist eine schwache Säure, oft als zwitterionischer Puffer und pharmazeutisches Zwischenprodukt in der organischen chemischen Industrie verwendet.Es wird oft als Puffer für die Zellkultur wegen seiner Vorteile ausgewählt:

Standort und Pufferprodukte von Desheng

1Die Zersetzungskapazität von HEPES kann mit steigender Temperatur erhöht und mit abnehmender Temperatur abgeschwächt werden, im Vergleich zu anderen Puffern jedoch ist die Zersetzungskapazität von HEPES im Vergleich zu anderen Puffern gering.seine Zersetzungskonstante ändert sich nicht viel mit der Temperatur, wasHEPES-PufferDer Puffer kann einen konstanten pH-Wert über einen längeren Zeitraum kontrollieren und hat keine toxische Wirkung auf die Zellen.

2Der pH-Wert für die meisten Zellen beträgt 7,2-7.4, HEPES hat eine gute Pufferkapazität in diesem Bereich, aber der optimale pH-Wert variiert je nach Zellart der Zellkultur.Bei Subkultur-Zelllinien ist ein saurer pH-Wert erforderlich (7Die meisten Kulturmedien sind auf Natriumbicarbonat (NaHCO3) und CO2-System zur Pufferung angewiesen.Die CO2-Konzentration in der Gasphase sollte mit der Natriumbicarbonatkonzentration im Kulturmedium ausgeglichen werden.In diesem Fall sollte die Kappe der Zellkulturflasche nicht zu fest verschraubt werden, um den Gasaustausch zu gewährleisten.

Nach einer bestimmten Lagerung erhöht sich der pH-Wert des Puffersystems jedoch mit der Vapolierung des CO2.Die Kulturlösung wird schnell lila, wenn die Zelle subkulturell und geblasen wirdAuch wenn sie überlebt, ist ihre Aktivität ebenfalls sehr gering und die Proliferationsrate sehr langsam.Das Hinzufügen von HEPES zur Kulturlösung kann dieses Problem vermeiden.. HEPES kann als Puffer zum Ersetzen von Bicarbonat verwendet werden, um die Einschränkung der CO2-Kultur mit hoher Konzentration zu beseitigen..

Wie wird HEPES angewendet:

1. HEPES kann direkt in der erforderlichen Konzentration der zubereiteten Kulturlösung zugesetzt und dann durch Filtration sterilisiert werden.pH-Wert auf 7.2 mit lN NaOH nach Auflösung, filtern und sterilisieren und verwenden.

2Vor der Anwendung wird 99 ml Kulturlösung in die Lml-Speicherlösung hinzugefügt, wobei die Endkonzentration bei 10 mmol/L bleibt.L mol/L (100 x) HEPES-Stammlösung: 23,8 g HEPES in 90 ml doppelt destilliertem Wasser auflösen, den pH-Wert auf 7,5-8,0 mit 1 N NaOH einstellen, dann auf 100 ml mit Wasser verdünnen, filtern und sterilisieren und die Durchstechflaschen austeilen (2 ml/Flasche), bei 4°C oder -20°C lagern.

Desheng Biochemical erinnerte daran, dass, wenn es als Puffer für die Zellkultur verwendet wird,HEPES im Kulturmedium, das mehr als 3 Stunden lang sichtbarem Licht ausgesetzt ist, erzeugt Wasserstoffperoxid, das für die Zellen giftig ist.Es wird empfohlen, das Kulturmedium im Dunkeln zu lagern.