Saurer Puffer der Vorbereitungs-Methoden-1,4-Piperazinediethanesulfonic

Ein hocheffizientes Verfahren zur Herstellung von 1,4-Piperazinediethan-Sulfonsäure-Puffern

Piperazine-Diethansulfonsäure PIPES verfügt über verschiedene Puffersysteme,unter denen die Pufferlösung Transformation Buffer (auch TB-Lösung genannt) zur Vorbereitung hocheffizienter kompetenter Zellen verwendet werden kann.

Competent state refers to a special physiological state in which cells (or bacteria) can take up DNA molecules from the surrounding environment and are not easily broken down by restriction endonucleases in the cellEinige Bakterien sind natürlich kompetent, wie z.B. Bacillus subtilis, und einige sind künstlich kompetent, wie z.B. Escherichia coli.Die Behandlung der Empfängerzellen mit einer speziellen Methode kann die Durchlässigkeit der Zellmembran verändern, was es zu einer kompetenten Zelle macht, die es Trägermolekülen mit fremder DNA erlaubt, durchzusteigen.

Zuständige TB-Lösungsrohstoff-PIPES-Pulver

Vorbereitung des Transformationspuffers:

Bei der Umwandlung kompetenter Bakterienzellen wird das Calciumchloridverfahren angewandt.37 Grad über Nacht, bis eine einzige Kolonie wächst.Wählen Sie eine Kolonie mit einem Durchmesser von 1-3 mm aus, um das SOB-Medium in einem 250 ml/3 l Erlenmeyer-Flaschen oder 80 ml/1 l Erlenmeyer-Flaschen zu impfen.Stoppen Sie die Kultur, wenn die OD600 bei 0 liegt..4-0.8, 10 Minuten in 4 Grad Eiswasser abkühlen, 15 Minuten bei 300 RPM zentrifugieren, die Bakterien nach dem Entfernen des Supernatants wiederherstellen, in 1/3 Volumen eiskalte TB-Lösung suspendieren,und wieder für 10 Minuten zentriformieren, um die Bakterien wiederherzustellen. mit einem Volumen von 1/12,5 TB suspendiert, DMSO mit einer Endkonzentration von 7% hinzugefügt und dann 10 Minuten lang in 0,1-1 ml Aliquoten gekühlt und direkt in flüssigem Stickstoff oder bei -80°C gelagert.

In der TB-Lösung aus suspendiertem Escherichia coli enthalten die Hauptbestandteile Puffer-PIPES und Calciumchlorid, um Zellen in kompetente Zellen umzuwandeln.Es ist zu beachten, dass diese Methode für E. coli-Stämme, die keine Plasmide enthalten und für große Plasmide nicht geeignet sind.die optimale OD600 der verschiedenen Bakterienstämme ist ebenfalls unterschiedlich, und muss je nach Versuch angepasst werden.

Es gibt viele Methoden zur Herstellung kompetenter Zellen mit Tuberkulose, und die Wirksamkeit der verschiedenen Methoden kann unterschiedlich sein, und auch die anwendbaren Stämme oder Zelltypen können unterschiedlich sein.Das von Desheng hergestellte PIPES ist ein Pulverreagenz, und kompetente TB-Lösungen können je nach Bedarf vorbereitet werden.

Desheng Biochemical ist ein Hersteller, der sich auf die Produktion von biologischen Puffern in China spezialisiert hat.4-(2-Hydroxyethyl)-1-Piperazinethanesulfonsäure, 3-Cyclohexylaminopropanesulfonsäure, etc., alle mit einer Reinheit von über 99%, wenn nötig Geschäftsfreunde von Ihnen können uns kontaktieren!